2009 H1N1pdm流感病毒血凝素單抗庫的構建與應用.pdf

1、H1N1流感病毒是影響人類健康的季節(jié)性流感病毒之一，在歷史上曾發(fā)生過2次全球大流行，而2009年4月爆發(fā)的甲型H1N1流感(2009 H1N1pdm)全球大流行，使得H1N1再次成為全球關注的焦點。疫情的控制需要高靈敏度、高特異性的診斷試劑，對于病毒的持續(xù)流行和變異需要及時掌握其變異規(guī)律，病毒變異持續(xù)產(chǎn)生的NA抑制劑的耐藥株也提示有必要研究新型治療性抗體藥物。血凝素蛋白(HA)是流感病毒的重要膜蛋白，與病毒的抗原性和毒力密切相關，是研制

2、特異性診斷試劑、疫苗和抗體治療藥物的重要靶標。本研究以HA為靶標研制2009 H1N1pdm病毒的HA特異性單抗，應用這些單抗開展了三方面的研究工作:(1)研制2009 H1N1pdm病毒的抗原快速診斷試劑;(2)研究HA單抗的抗病毒治療效果;(3)探索單抗在病毒的抗原性變異規(guī)律研究中的作用，以期為疫情的預防控制、疾病治療和疫苗株的選擇更新提供技術手段和理論支持。具體研究大致如下:
　　第一，在疫情爆發(fā)初期分離并培養(yǎng)了25株200

3、9 H1N1 pdm流感病毒。根據(jù)病毒HA1關鍵抗原性位點的突變，從中選了5株代表性病毒株用于單抗制備和評價，建立了一個包含70株HA特異性單抗的單抗庫。隨著病毒的持續(xù)分離，到2009年底，共分離了66株2009 H1N1pdm病毒，分離率為76.7％，并加入2株代表性毒株用于單抗的性質鑒定。依據(jù)單抗對代表性毒株的血凝抑制試驗反應譜，將單抗分為六大類(M1-M6)，并從各類中挑出17個代表性單抗組成單抗盤(MAb panel)，用于病毒

4、的監(jiān)控及抗原性變異分析。
　　第二，利用已建立的單抗庫，篩選出最佳單抗配對(10B4+1E12-HRP)，并開發(fā)出ELSIA抗原快速診斷試劑盒。實驗室評價顯示，試劑盒對培養(yǎng)病毒的檢測下限為103.0±0.4 TCID50/mL(0.009±0.005 HA titer)，且對非2009 H1N1pdm流感病毒及其他呼吸道病原體無交叉。臨床標本評價顯示，試劑盒的靈敏度為92.3％，特異性為97.7％。
　　第三，本研究建立了2

5、009 H1N1pdm流感病毒小鼠的動物感染模型，并應用該模型評價了HA單抗在被動免疫治療中的作用，結果顯示單抗6B9具有很好的治療效果，對病毒感染小鼠的保護率為100％，未治療的對照組小鼠在病毒感染后一周左右全部死亡，結果還顯示單抗6B9的最低有效給藥劑量為2.5mg/kg。
　　第四，應用單抗盤對2009 H1N1pdm病毒進行監(jiān)測分析，發(fā)現(xiàn)多個可能引起抗原性漂移的氨基酸變異，為2009 H1N1pdm病毒的抗原性變異監(jiān)測提供