白細(xì)胞介素18、ICE在卵巢上皮性癌中表達(dá)及其意義的研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文白細(xì)胞介素18、ICE在卵巢上皮性癌中表達(dá)及其意義的研究姓名：郅玲玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：郝淑維20050301中文摘要方法:本研究標(biāo)本取自河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2003年2月至2004年8月在婦產(chǎn)科初次治療的卵巢癌患者，術(shù)后均經(jīng)病理確診。卵巢上皮性癌患者32例，其中漿液性癌15例，粘液性癌7例，子宮內(nèi)膜樣癌10例。根據(jù)國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟FIGO1986年)標(biāo)準(zhǔn)分期，I、II期8例，IIIN期24例

2、。選擇同期因婦科良性疾病手術(shù)治療患者的正常卵巢組織10例，6例良性卵巢腫瘤，其中3例為漿液性囊腺瘤3例為粘液性囊腺瘤。所有標(biāo)本于術(shù)中離體半小時(shí)內(nèi)取材，立即置于液氮速凍，并保存于一80℃冰箱備用。另留取一份經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋。切片備用。1.半定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)方法檢測(cè)IL18ICE基因的表達(dá)。從癌組織標(biāo)本中或卵巢癌細(xì)胞中提取RNA，并通過(guò)電泳和紫外分光光度儀檢測(cè)總RNA的完整性和純度。對(duì)總RNA定量后進(jìn)行R

3、TPCR擴(kuò)增。用0actin作為內(nèi)參照。反應(yīng)完畢對(duì)RTPCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分離，用凝膠成像系統(tǒng)觀察電泳DNA條帶，并用凝膠成像分析軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行相對(duì)定量分析。2.免疫組織化學(xué)方法及免疫細(xì)胞化學(xué)方法進(jìn)行IL18ICE蛋白定位。組織標(biāo)本切片，常規(guī)脫臘至水，3%甲醇過(guò)氧化氫液室溫巧分鐘，以去除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，構(gòu)橡酸緩沖液進(jìn)行熱抗原修復(fù)。血清封閉，加入1:200兔抗人IL181:50兔抗人ICE抗體4℃過(guò)夜，滴加11抗、III抗，DAB顯色