MiR-222在非小細胞肺癌的表達及預后價值.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  評估m(xù)iR-222表達水平在非小細胞肺癌(NSCLC)患者中的臨床意義。檢測NSCLC肺癌組織和鄰近正常組織miR-222的表達水平;分析miR-222水平與各項臨床參數的關系;評估m(xù)iR-222表達水平與臨床預后的關系。分析miR-222水平與鉑類藥物耐藥性的關系以及血漿miR-222水平與肺癌組織miR-222水平的相關性。
  方法:
  1)研究對象和樣本保存:
  所有入選研究對象符合以下標

2、準:入選患者的肺癌組織均經過病理診斷,明確為NSCLC;無既往癌癥病史;均簽署知情同意書。例肺癌組織和相對應的距病灶5cm以上的相應正常肺組織取自我院收治的肺癌患者。標本取材在手術室內無菌操作,手術切下后5分鐘內取材,并迅速置于液氮凍存。血漿樣本保存于-20度冰箱備測。
  所有入選患者接受臨床體格檢查、胸片、胸部、上腹部以及腦部CT掃描、纖支鏡檢查和骨組織掃描。所有患者均未在手術前接受放化療,標本均經病理學證實,病人姓名、年齡、

3、性別、吸煙史、家族史等以及臨床病理資料:腫瘤大小、組織類型、淋巴結轉移、TNM分期、脈管瘤栓、胸膜侵犯等各項臨床資料。手術結束后,患者開始接受隨訪,隨訪5年,從手術到終點事件(死亡或者隨訪截止)之間的時間被計算為生存時間。
  2)RNA提取及Realtime-PCR:
  取液氮保存的肺癌組織或和正常肺組織約100mg,在液氮環(huán)境下研缽研磨:組織塊直接放入研體中,加入適量液氮,迅速研磨;加入trizol,提取組織總RNA。

4、2ugRNA產物進行RT-PCR反應,采用SYBR染料法和ABI7500realtime PCR儀進行反應。95℃,5min;40個PCR循環(huán)(95℃,10秒;60℃,20秒;72℃,20秒;78℃,20秒(收集熒光)。為了建立PCR產物的熔解曲線,擴增反應結束后繼續(xù)從72℃緩慢加熱到99℃(每5秒升高1℃)。表達量的變化用公式RQ=2-ΔCt計算,其中ΔCt=(Ct miR-222-Ct U6)。RQ代表相對表達量,Ct miR-22

5、2和Ct U6分別代表熒光定量檢測到的目標miRNA和內參基因U6的Ct值。采用mi ScriptSYBRGreenPCRKit(Qiagen)和mi ScriptPrime AssaymiR-222對血漿樣本中的miR-222進行實時定量熒光擴增。表達量分析方法同上。
  3)統(tǒng)計學分析:
  采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。數據以均數±標準誤(Mean±S.E.M)表示,兩組間比較采用t檢驗。從手術到終點事件(死亡或者

6、隨訪截止)之間的時間被計算為生存時間;生存分析采用Kaplan-Meier曲線和Log-Rank檢驗;運用單因素COX風險比例模型初步識別患者各項指標危險指數HR,之后運用多因素COX風險比例模型排除混雜因素從而識別出獨立的預后因素和校正HR,分析miR-222與各項臨床指標以及術后生存期的關系。相關分析用單因素Pearson分析設定檢驗水準α=0.05,采取雙側檢驗,雙側P<0.05認為有差異。
  結果:
  1.miR

7、-222在NSCLC患者肺癌組織高表達
  RT-PCR結果顯示對比鄰近正常肺組織,NSCLC患者肺癌組織miR-222表達明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。
  2.miR-222表達高低與NSCLC患者各項臨床病理參數之間的關系
  TNM分期I-II期和III期患者,肺癌組織miR-222表達水平在III期患者明顯高于I-II期患者,累及遠處淋巴結的患者肺癌組織miR-222表達水平也要高于沒有累及

8、遠處淋巴結的患者(P<0.001)。
  3.miR-222表達與NSCLC患者預后的關系
  Kaplan-Meier生存分析顯示miR-222高表達的NSCLC肺癌患者相對于低表達的NSCLC肺癌患者術后生存期更短,5年生存率為9.37%vs。36.69%(P=0.0025,log-rank test)。單因素COX風險比例模型顯示miR-222高表達是一項預示NSCLC肺癌患者較差預后的有意義的指標(風險比(HR)=2

9、.7102,P<0.001),其他臨床病理指標包括較高的臨床分期((HR=3.122,P<0.001)和淋巴結轉移(HR=2.123,P<0.001)也被篩選為較差預后的指標。多因素COX風險比例模型分析排除了混雜因素,miR-222高表達依然是一項預示NSCLC肺癌患者較差預后的有意義的指標((HR=3.31,P<0.001),較高的臨床分期((HR=0.76,P<0.001)和淋巴結轉移(HR=0.68,P<0.001)也是獨立的不

10、良預后因素。
  4.血漿miR-222表達水平與NSCLC的關系
  對比正常健康者,NSCLC患者血漿miRNA-222水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義,P<0.01。對比化療敏感者,耐藥者血漿miR-222水平明顯升高,差異具有統(tǒng)計學意義,P<0.01。相關分析結果顯示血漿miR-222的表達水平和肺癌組織miR-22水平呈正相關(P=0.012;相關系數,r=0.575),該結果提示了血漿miR-222水平在一定程度

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