纖維蛋白在多發(fā)性硬化發(fā)病機制中的作用及視神經(jīng)脊髓炎特異性自身抗體診斷價值研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：降低纖維蛋白預防及治療多發(fā)性硬化動物模型的實驗研究
　　 目的:研究降低纖維蛋白對多發(fā)性硬化(MS)動物模型實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠的預防及治療作用，初步探討纖維蛋白沉積在多發(fā)性硬化中的作用機制。
　　 方法:采用MOG35-55免疫的C57BL/6雌性小鼠，誘發(fā)EAE動物模型，分別在免疫后立即(預防組)及免疫后出現(xiàn)癥狀(治療組)隔日連續(xù)給予降纖藥巴曲酶( 30B

2、U/kg)注射至實驗結束，觀察發(fā)病情況并進行臨床癥狀評分。于免疫后30天、40天及60天分別將預防組、治療組及EAE對照組小鼠脊髓與小腦組織取材后進行組織病理學與免疫組化染色分析，Western-blot和實時熒光定量PCR技術及體外RAW 264.7巨噬細胞培養(yǎng)觀察藥物干預對炎性浸潤、脫髓鞘、纖維蛋白沉積及膠質(zhì)細胞活化的影響。此外，還采用神經(jīng)電生理技術觀察小鼠視覺誘發(fā)電位(VEP) P100的潛伏期和波幅的變化。
　　 結果:

3、降纖預防組及治療組均可明顯減輕EAE小鼠的發(fā)病癥狀、降低臨床評分。巴曲酶預防組和治療組較EAE未用藥對照組小鼠炎性細胞浸潤明顯減少、髓鞘脫失及膠質(zhì)細胞活化減輕，但軸索損害的改善作用不明顯。免疫組化及免疫熒光雙標結果表明，預防組和治療組較EAE未用藥對照組的小腦MBP表達升高而GFAP表達降低.Western-blot結果示MHC-I類分子蛋白表達無顯著差異，p-Akt表達降低而MBP蛋白表達升高.實時熒光定量PCR技術也證實了巴曲酶預防

4、及治療組MBP的mRNA表達升高，t-PA的mRNA表達也升高.此外，纖維蛋白和LPS一樣可誘導體外培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細胞發(fā)生炎癥反應，表現(xiàn)為細胞體積變大并有樹突樣改變，巴曲酶加入后可逆轉這種巨噬細胞的樹突樣變化.同時，纖維蛋白免疚熒光檢測，在預防組和治療組陽性信號較EAE對照組降低，但通過檢測小鼠眼靜脈血的纖維蛋白原濃度發(fā)現(xiàn)，預防和治療組有降低趨勢，但與對照組相比差異無明顯統(tǒng)計學意義.神經(jīng)電生理技術觀察結果提示，EAE組小鼠較

5、空白對照組小鼠的閃光VEP的P100潛伏期延長、波幅減低，而巴曲酶用藥組小鼠的P100潛伏期延長、波幅減低有所改善。
　　 結論:在EAE的發(fā)病過程中纖維蛋白沉積發(fā)揮了重要作用，巴曲酶通過有效降低EAE小鼠體內(nèi)的纖維蛋白從多個方面改善臨床癥狀和發(fā)病過程。
　　 第二部：分血清水通道蛋白-4(AQP-4)抗體對視神經(jīng)脊髓炎的診斷價值研究
　　 目的：研究血清AQP-4抗體對視神經(jīng)脊髓炎的診斷價值。
　　 方

6、法：收集解放軍總醫(yī)院2008年11月至2009年6月住院和門診臨床診斷的患者共80例，其中NMO及高危NMO患者23例(NMO11例，HR-NMO 12例)，經(jīng)典MS患者36例，臨床孤立綜合征(clinical isolated syndrom, CIS)11例(單次發(fā)病的視神經(jīng)炎2例，脊髓炎5例及顱內(nèi)脫髓鞘4例)，其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者10例(包括亞急性聯(lián)合變性1例、腦梗死5例、腦出血3例、神經(jīng)纖維瘤1例).采用細胞間接免疫熒光法檢測所

7、有患者血清AQP-4抗體滴度水平，比較各組患者臨床特點及AQP-4水平。
　　 結果：NMO、HR-NMO組與MS、CIS組相比，發(fā)生嚴重視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎、有顱腦MRI正常表現(xiàn)、脊髓病灶超過3個推體節(jié)段及血清AQP-4抗體陽性均有統(tǒng)計學意義(p<0.05). NMO與HR-NMO組血清AQP-4抗體水平顯著高于MS組，而MS組血清 AQP-4抗體又略高于CIS組與其他疾病組。血清AQP-4抗體對診斷NMO的靈敏度達82.6