纖維蛋白在多發(fā)性硬化發(fā)病機(jī)制中的作用及視神經(jīng)脊髓炎特異性自身抗體診斷價(jià)值研究.pdf

1、本研究分為二部分：
　　 第一部分：降低纖維蛋白預(yù)防及治療多發(fā)性硬化動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的:研究降低纖維蛋白對(duì)多發(fā)性硬化(MS)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠的預(yù)防及治療作用，初步探討纖維蛋白沉積在多發(fā)性硬化中的作用機(jī)制。
　　 方法:采用MOG35-55免疫的C57BL/6雌性小鼠，誘發(fā)EAE動(dòng)物模型，分別在免疫后立即(預(yù)防組)及免疫后出現(xiàn)癥狀(治療組)隔日連續(xù)給予降纖藥巴曲酶( 30B

2、U/kg)注射至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，觀察發(fā)病情況并進(jìn)行臨床癥狀評(píng)分。于免疫后30天、40天及60天分別將預(yù)防組、治療組及EAE對(duì)照組小鼠脊髓與小腦組織取材后進(jìn)行組織病理學(xué)與免疫組化染色分析，Western-blot和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)及體外RAW 264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)觀察藥物干預(yù)對(duì)炎性浸潤(rùn)、脫髓鞘、纖維蛋白沉積及膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。此外，還采用神經(jīng)電生理技術(shù)觀察小鼠視覺(jué)誘發(fā)電位(VEP) P100的潛伏期和波幅的變化。
　　 結(jié)果:

3、降纖預(yù)防組及治療組均可明顯減輕EAE小鼠的發(fā)病癥狀、降低臨床評(píng)分。巴曲酶預(yù)防組和治療組較EAE未用藥對(duì)照組小鼠炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少、髓鞘脫失及膠質(zhì)細(xì)胞活化減輕，但軸索損害的改善作用不明顯。免疫組化及免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果表明，預(yù)防組和治療組較EAE未用藥對(duì)照組的小腦MBP表達(dá)升高而GFAP表達(dá)降低.Western-blot結(jié)果示MHC-I類分子蛋白表達(dá)無(wú)顯著差異，p-Akt表達(dá)降低而MBP蛋白表達(dá)升高.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)也證實(shí)了巴曲酶預(yù)防

4、及治療組MBP的mRNA表達(dá)升高，t-PA的mRNA表達(dá)也升高.此外，纖維蛋白和LPS一樣可誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的RAW264.7巨噬細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大并有樹(shù)突樣改變，巴曲酶加入后可逆轉(zhuǎn)這種巨噬細(xì)胞的樹(shù)突樣變化.同時(shí)，纖維蛋白免疚熒光檢測(cè)，在預(yù)防組和治療組陽(yáng)性信號(hào)較EAE對(duì)照組降低，但通過(guò)檢測(cè)小鼠眼靜脈血的纖維蛋白原濃度發(fā)現(xiàn)，預(yù)防和治療組有降低趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.神經(jīng)電生理技術(shù)觀察結(jié)果提示，EAE組小鼠較

5、空白對(duì)照組小鼠的閃光VEP的P100潛伏期延長(zhǎng)、波幅減低，而巴曲酶用藥組小鼠的P100潛伏期延長(zhǎng)、波幅減低有所改善。
　　 結(jié)論:在EAE的發(fā)病過(guò)程中纖維蛋白沉積發(fā)揮了重要作用，巴曲酶通過(guò)有效降低EAE小鼠體內(nèi)的纖維蛋白從多個(gè)方面改善臨床癥狀和發(fā)病過(guò)程。
　　 第二部：分血清水通道蛋白-4(AQP-4)抗體對(duì)視神經(jīng)脊髓炎的診斷價(jià)值研究
　　 目的：研究血清AQP-4抗體對(duì)視神經(jīng)脊髓炎的診斷價(jià)值。
　　 方

6、法：收集解放軍總醫(yī)院2008年11月至2009年6月住院和門(mén)診臨床診斷的患者共80例，其中NMO及高危NMO患者23例(NMO11例，HR-NMO 12例)，經(jīng)典MS患者36例，臨床孤立綜合征(clinical isolated syndrom, CIS)11例(單次發(fā)病的視神經(jīng)炎2例，脊髓炎5例及顱內(nèi)脫髓鞘4例)，其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病患者10例(包括亞急性聯(lián)合變性1例、腦梗死5例、腦出血3例、神經(jīng)纖維瘤1例).采用細(xì)胞間接免疫熒光法檢測(cè)所

7、有患者血清AQP-4抗體滴度水平，比較各組患者臨床特點(diǎn)及AQP-4水平。
　　 結(jié)果：NMO、HR-NMO組與MS、CIS組相比，發(fā)生嚴(yán)重視神經(jīng)炎、橫貫性脊髓炎、有顱腦MRI正常表現(xiàn)、脊髓病灶超過(guò)3個(gè)推體節(jié)段及血清AQP-4抗體陽(yáng)性均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05). NMO與HR-NMO組血清AQP-4抗體水平顯著高于MS組，而MS組血清 AQP-4抗體又略高于CIS組與其他疾病組。血清AQP-4抗體對(duì)診斷NMO的靈敏度達(dá)82.6