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文檔簡介
1、目的:研究HBX基因對Gankyrin表達水平的影響以及Wnt/β-catenin信號通路在HBX基因調控Gankyrin表達中的作用,試圖闡明乙肝相關性HCC的發(fā)病過程中可能的分子機制。
方法:
1.運用RT-PCR與Western-blot技術分別從mRNA水平和蛋白質水平檢測Gankyrin在HepG2與HepG2.2.15細胞中的表達水平;
2.Ad—HBX感染HepG2與SMMC-7721細胞,運
2、用RT-PCR與Western-blot技術分別從mRNA水平和蛋白質水平檢測Gankyrin的表達情況;
3.用脂質體將siRNA-HBX分子轉染HpeG2.2.15細胞,運用RT-PCR與Western-Blot技術分別從mRNA水平和蛋白質水平檢測Gankyrin的表達情況;
4.Ad—β-catenin轉染HepG2、SMMC-7721細胞,Western-blot法檢測β-catenin與Gankyrin的
3、表達情況;
5.在沉默β-catenin的HepG2、SMMC-7721細胞中過表達HBX基因,Western-blot法檢測β-catenin與Gankyrin的表達情況。
結果:
1.HepG2.2.15細胞Gankyrin表達水平比HepG2細胞Gankyrin表達水平高;
2.HepG2與SMMC-7721細胞系中Ad—HBX-GFP組較Ad—GFP組,Gankyrin表達水平明顯升高;<
4、br> 3.HepG2.2.15細胞中Si-HBX組較Si-NC組,Gankyrin表達水平明顯下降;
4.在HepG2與SMMC-7721細胞系中過表達β-catenin后,Ad—β-catenin-GFP組較Ad-GFP組Gankyrin的表達水平較對照組明顯上調;
5.在HepG2與SMMC-7721細胞系中沉默β-catenin后,過表達HBX基因,Gankyrin的表達水平未見升高.
結論:通過
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