大黃酸、大黃素誘導高糖狀態(tài)下腎小球系膜細胞凋亡的比較性研究.pdf

1、目的：探討大黃酸、大黃素對高糖狀態(tài)下SD大鼠腎小球系膜細胞(Glomerularmesangial cell，GMC)凋亡的影響。
　　方法：在高糖狀態(tài)下建立腎小球系膜細胞增殖病理模型，MTT法檢驗；用不同濃度的大黃酸(20，40，80μmol·L-1)、大黃素(20，40，80μmol·L-1)分別刺激高糖狀態(tài)下GMC；HE染色(hematoxylin-eosin staining)觀察細胞形態(tài)學變化；DAPI(4’，6-Dia

2、midino-2-phenylindole，dihydrochloride)熒光染色觀察細胞核凋亡情況；流式細胞儀檢測細胞凋亡率。
　　結果：1、系膜細胞增殖模型的研制
　　25mmol/L的葡萄糖刺激24小時即顯著地促進了系膜細胞增生，且這種作用在刺激48小時最為明顯，說明系膜細胞增殖模型符合實驗要求。
　　2、實驗結果
　　2.1HE染色結果
　　與正常組比較，大黃酸組24h20μmol·L-1細胞碎片

3、增多，凋亡細胞產生，細胞皺縮，胞膜完整，細胞核固化，密度增大，染色質凝聚，嗜堿性增強，細胞核染成深藍色；48h時細胞已皺縮成團細胞核碎裂成多個顆粒，胞膜不完整；40μmol·L-1、80μmol·L-1，細胞嚴重皺縮成細長形，貼壁細胞數(shù)明顯減少，胞核變小且密度增大，染色質凝聚，嗜堿性增強，染成深藍色；48h時，視野內細胞數(shù)較24h減少更多，細胞皺縮成團，胞核破碎成多個顆粒，胞膜不完整。大黃素組24h20μmol·L-1細胞形態(tài)沒有明顯變

4、化；40μmol·L-1時凋亡細胞產生，細胞皺縮但胞膜完整，胞核固化，密度增大，染色質凝聚，嗜堿性增強，胞核染成深藍色；80μmol·L-1，細胞皺縮成團，細胞數(shù)減少，碎裂成顆粒的細胞核增多；48h40μmol·L-1時，細胞皺縮，細胞數(shù)減少，部分細胞核碎裂成顆粒，胞質濃染；80μmol·L-1時視野內已找不到完整細胞核。
　　與大黃素組比較：24h、48h大黃酸低、中、高濃度細胞形態(tài)的改變較大黃素組明顯。
　　2.2DAP

5、I染色結果
　　與正常組比較：大黃酸組24h20μmol·L-1時部分細胞核染色質出現(xiàn)濃縮狀態(tài)，40μmol·L-1時細胞核裂解為碎片，完整細胞核較少，80μmol·L-1時基本沒有完整細胞核存在；48h20μmol·L-1時部分細胞核裂解為碎片，40μmol·L-1時完整細胞核較少，80μmol·L-1視野內很難找到完整細胞核。大黃素組24h20μmol·L-1時細胞核無明顯變化，40μmol·L-1完整細胞核減少，80μmol

6、·L-1產生凋亡小體；48h20μmol·L-1時，部分高度凝聚，未見細胞碎片，40μmol·L-1完整細胞核相對減少，20μmol·L-1時鏡下很難找到完整細胞核。
　　與大黃素組比較：隨著時間及劑量的增加，大黃酸低、中、高濃度組對細胞核的影響程度均強于大黃素各組。
　　2.3凋亡率檢測結果
　　24h時，細胞早期凋亡率與正常組比較：大黃酸高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05。
　　24h時，細胞晚期凋亡率和壞死

7、細胞率與正常組比較：大黃酸低、中、高濃度組均有統(tǒng)計學意義，p<0.05；大黃素高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05。
　　24h時，細胞早期凋亡率組內比較：與高濃度組比較，大黃酸低、中濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05。
　　24h時，細胞晚期凋亡率和壞死細胞率組內比較：與低濃度組比較，大黃酸中、高濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05；與中濃度組比較，大黃酸低、高濃度組均有統(tǒng)計學意義，p<0.05；與

8、高濃度組比較，大黃酸、大黃素低、中濃度組均有統(tǒng)計學意義，p<0.05。
　　48h時，細胞早期凋亡率與對照組比較：大黃素中濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05。48h時，細胞晚期凋亡率和壞死細胞率與對照組比較：大黃酸低、高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05；大黃素高濃度組均有統(tǒng)計學意義，p<0.05。
　　48h時，細胞晚期凋亡率和壞死細胞率組內比較：與低濃度比較，大黃酸高濃度組、大黃素高濃度組有統(tǒng)計學意義，p<0.05；與中濃度