脫細(xì)胞SIS作為真皮替代物的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:探討脫細(xì)胞SIS作為真皮替代物的可行性。 方法: 1、取自健康家豬的空腸，去除漿膜、肌層和黏膜，并采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL聯(lián)合脫細(xì)胞的方法處理制備脫細(xì)胞SIS。對(duì)其理化性能、組織學(xué)結(jié)構(gòu)及微生物學(xué)進(jìn)行檢測(cè)。 2、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)以脫細(xì)胞SIS為真皮支架與人表皮細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建復(fù)合皮。通過(guò)MTT檢測(cè)、組織學(xué)觀察、免疫組化檢測(cè)及掃描電鏡觀察，了解細(xì)胞生長(zhǎng)情況及復(fù)合皮結(jié)構(gòu)。 3、SD大鼠背部形成全層皮膚缺損

2、創(chuàng)面。實(shí)驗(yàn)組用脫細(xì)胞SIS作為真皮替代物與SD大鼠自體刃厚皮片進(jìn)行復(fù)合移植修復(fù)創(chuàng)面；對(duì)照組單純以自體刃厚皮片進(jìn)行移植修復(fù)創(chuàng)面。觀察兩組創(chuàng)面愈合的質(zhì)量及組織學(xué)變化。 結(jié)果： 1、脫細(xì)胞SIS厚度約0.1cm，為半透明狀、黃白色、質(zhì)地柔軟、彈性好的膜狀結(jié)構(gòu)。脫細(xì)胞SIS內(nèi)無(wú)細(xì)胞，具有多空隙的三維網(wǎng)狀空間結(jié)構(gòu)。微生物學(xué)檢測(cè)無(wú)微生物污染。 2、人表皮細(xì)胞在脫細(xì)胞SIS上能黏附、生長(zhǎng)，MTT法檢測(cè)結(jié)果，復(fù)合培養(yǎng)組與單純?nèi)吮?/p>

3、皮細(xì)胞培養(yǎng)組在各時(shí)間點(diǎn)的A570值(OD值)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。說(shuō)明脫細(xì)胞SIS對(duì)人表皮細(xì)胞增殖無(wú)促進(jìn)作用，但也無(wú)毒性作用，生物相容性好。HE染色和Masson染色組織學(xué)觀察，可見(jiàn)脫細(xì)胞SIS呈膠原網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，其內(nèi)無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，脫細(xì)胞SIS表面有一層細(xì)胞結(jié)構(gòu)。角蛋白免疫組化檢測(cè)證實(shí)脫細(xì)胞SIS表面生長(zhǎng)的細(xì)胞是表皮細(xì)胞。掃描電鏡下可見(jiàn)脫細(xì)胞SIS上表皮細(xì)胞融合生長(zhǎng)，透過(guò)細(xì)胞間隙可見(jiàn)其下的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的脫細(xì)胞SIS。 3、于術(shù)

4、后2、4、6周動(dòng)態(tài)觀察，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植后均獲得了滿意的皮片成活率，兩組移植皮片在各時(shí)間點(diǎn)的成活率對(duì)比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后4周及6周，與單純自體刃厚皮移植對(duì)照組比較，復(fù)合皮組植皮區(qū)收縮率均明顯減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)合皮組HE染色和Masson染色組織學(xué)觀察可見(jiàn)，術(shù)后2周，表皮下的真皮組織與SIS染色程度不一，明顯表現(xiàn)為兩層結(jié)構(gòu)，兩者的膠原排列不同。脫細(xì)胞SIS內(nèi)可見(jiàn)新生小血管長(zhǎng)入，大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有成纖維細(xì)胞由創(chuàng)面遷入

5、生長(zhǎng)。術(shù)后4周，復(fù)合皮的表皮下仍然可見(jiàn)兩種不同表現(xiàn)的膠原纖維結(jié)構(gòu)，仍然有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，有大量成纖維細(xì)胞遷入，可見(jiàn)大量的新生血管。術(shù)后6周，復(fù)合皮下已經(jīng)不能區(qū)分明顯的真皮組織及脫細(xì)胞SIS兩種膠原纖維結(jié)構(gòu)，而是被同一性的膠原結(jié)構(gòu)所取代；炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，可見(jiàn)大量的新生血管及成纖維細(xì)胞。 結(jié)論： l、采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL 聯(lián)合脫細(xì)胞的方法處理制備脫細(xì)胞SIS，可以完全除去具有抗原成分的細(xì)胞；得到的脫細(xì)胞S