負壓創(chuàng)面療法治療感染性軟組織損傷相關機制研究.pdf

1、研究背景:
　　創(chuàng)面感染一直是骨科領域長期致力解決的難題。前期研究認為:感染是細菌與宿主體內(nèi)環(huán)境相互作用的復雜過程;金葡菌致病力不僅與數(shù)量有關,更取決于細菌菌群狀態(tài)和毒力因子表達。而且病原菌會適應環(huán)境變化調(diào)節(jié)相應的致病基因表達模式。負壓創(chuàng)面療法是一種能夠有效治療感染性軟組織損傷的治療方法,通過負壓引流作用可在不減少細菌數(shù)量的情況下,顯著控制感染,但其內(nèi)在機制尚不明確。本研究擬采用金黃色葡萄球菌感染軟組織損傷動物模型,通過研究負壓創(chuàng)

2、面療法對金葡菌感染行為、群體感應agr系統(tǒng)、毒力狀態(tài)以及機體固有免疫系統(tǒng)的作用機制,深化細菌性感染控制的認識與理論。
　　目的:
　　1.探討負壓創(chuàng)面療法作用下細菌感染行為的改變與組織內(nèi)即時細菌數(shù)量的變化趨勢;2.探討負壓引流作用對金葡菌上游群體感應系統(tǒng)的影響,以及毒力因子表達與含量的變化;3.通過對炎性因子表達,固有免疫細胞趨化聚集的研究,探索負壓創(chuàng)面療法對機體固有免疫系統(tǒng)的影響。
　　方法:
　　1.建立金葡

3、菌感染軟組織開放性損傷動物模型,通過常規(guī)無菌紗布治療與負壓創(chuàng)面療法的對照,應用掃描電鏡(SEM)、透射電鏡(TEM)、激光共聚焦顯微鏡(LSCM)等方法分析創(chuàng)面表面及組織內(nèi)菌群形態(tài)、侵襲深度及數(shù)量變化,評估細菌感染行為的變化。
　　2.應用上述實驗模型與方法,通過實時熒光定量PCR(Real-time PCR)、免疫印跡分析(Western Blot)評估金葡菌群體感應 agr系統(tǒng)活性,并檢測毒力因子的表達及含量。
　　3.

4、檢測創(chuàng)面組織內(nèi)炎性因子IL-1β、IL-8和TNF-α的表達,對標本進行病理學檢查,并定量分析不同組織深度內(nèi)中性粒細胞聚集的數(shù)量。
　　結(jié)果:
　　1.相比無菌紗布治療,負壓創(chuàng)面療法作用下創(chuàng)面表面和組織內(nèi)細菌均呈散在分布,且隨治療時間延長逐步明顯;微菌群中的金葡菌散在分布,增生不活躍;同時細菌侵襲深度顯著減低。
　　2.無菌紗布治療與負壓創(chuàng)面療法兩組在治療day8時,創(chuàng)面細菌數(shù)量分別為治療前的141.9±15.4％和3

5、4.6±5.5%(P<0.01);但根據(jù)相對比值的計算,細菌的絕對數(shù)量僅減少了一個數(shù)量級,仍遠高于10^5CFU/g組織。
　　3.相比無菌紗布治療,負壓創(chuàng)面療法能夠降低金葡菌agrA的表達。
　　4.負壓創(chuàng)面療法能夠顯著減少eap,spa和hla的表達,其隨時間變化具有明顯減少趨勢;組織中上述毒力因子含量低于無菌紗布治療,隨治療時間延長而顯著減少。
　　5.在感染早期,負壓創(chuàng)面療法一方面能夠增加IL-1β和IL-8的

6、表達,從調(diào)控上游激活固有免疫反應;另一方面抑制TNF-α的過度表達,避免出現(xiàn)過度炎癥反應,降低自身損害。
　　6.負壓創(chuàng)面療法能夠有效促進創(chuàng)面組織內(nèi)中性粒細胞聚集,尤其在細菌侵潤的創(chuàng)面淺表層中大量聚集。
　　結(jié)論:
　　1.負壓創(chuàng)面療法通過改變細菌的外部環(huán)境,從而影響菌群形態(tài)、增殖程度及侵襲深度等感染行為。
　　2.負壓創(chuàng)面治療一定程度上減少了組織內(nèi)細菌的數(shù)量,但不是控制感染的主要作用機制。
　　3.負壓作