甲狀腺激素對大鼠睪丸間質細胞再生的影響.pdf

1、目的：應用硝基藍四唑鹽(NBT)法、HE染色和磁分離均相酶聯(lián)免疫法等方法觀察睪丸間質細胞(Leydigcells,LCs)被二甲磺基乙烷(ethanedimethanesulphonate，EDS)破壞后在甲狀腺機能亢進和甲狀腺機能減退情況下的再生情況，探討甲狀腺激素對成熟大鼠LCs再生的影響。 方法：選用90日齡雄性SD大鼠54只，EDS一次性腹腔注射(85mg/kg)破壞LCs。將54只EDS處理后的大鼠隨機分為三組：甲狀腺

2、機能亢進組、甲狀腺機能減退組和對照組，每組18只。 甲狀腺機能亢進組大鼠在注射EDS當日起每天皮下注射T3(60μg/kg)一次，造成甲狀腺機能亢進模型；甲狀腺機能減退組大鼠在注射EDS當日起每天用50mg丙硫氧嘧啶水溶液灌胃一次，建立甲狀腺機能減退模型；對照組大鼠在注射EDS當日起每天皮下注射含0.025MNaOH的生理鹽水0.8ml。 分別在注射EDS后的第7天、14天和21天麻醉大鼠、取材，進行如下指標的觀察：①L

3、Cs的再生情況：取睪丸-70℃速凍，Leica冰凍切片機切片，片厚15μm，NBT法顯示LCs內的3β-HSD酶，判定LCs的再生情況。②LCs的功能：取睪丸組織體外培養(yǎng)，加入黃體生成素(LH)后，采用磁酶免法檢測上清液中睪酮的含量；下腔靜脈取血，離心取血清，磁酶免法檢測血清中睪酮的含量。③LCs的形態(tài)和數(shù)量：取睪丸，10％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，光鏡下觀察LCs形態(tài)和數(shù)量的變化。 結果：1NBT染色結果1.

4、1甲狀腺機能亢進組：第7天未觀察到3β-HSD陽性細胞，第14天開始出現(xiàn)少量藍紫色陽性細胞團即新生的LCs，第21天出現(xiàn)大量藍紫色陽性細胞團；第21天的3β-HSD陽性細胞數(shù)明顯多于第14天(P＜0.05)。 1.2甲狀腺機能減退組：第7天、14天、21天三個時間點，均未觀察到3β-HSD陽性細胞。 1.3對照組：第7天、14天均未觀察到3β-HSD陽性細胞；第21天可見少量陽性細胞，但陽性細胞數(shù)顯著低于甲狀腺機能亢進組

5、(P＜0.05)。 2LCs的功能2.1甲狀腺機能亢進組：第7天，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測到睪酮；第14天、21天均可檢測到睪酮。第21天的睪酮水平明顯高于第14天(P＜0.05)；在相同的時間點，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液中的睪酮水平顯著高于血清中的睪酮水平(P＜0.05)。 2.2甲狀腺機能減退組：第7天、14天、21天睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測到睪酮。 2.3對照組：第7天、14天睪丸

6、組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中均未檢測到睪酮。第21天可檢測到睪酮，睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液中的睪酮含量明顯高于血清中的睪酮含量(P＜0.05)；第21天，對照組睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中的睪酮含量均顯著低于甲狀腺機能亢進組(P＜0.05)。 3HE染色結果3.1甲狀腺機能亢進組：第7天未觀察到LCs；生精小管破壞、呈不規(guī)則形，生精細胞缺失。第14天可見睪丸間質中出現(xiàn)少量新生的LCs，細胞呈圓形，單個存在，核大而圓，胞質較少。第2

7、1天，睪丸間質中可見大量成團的LCs；生精小管的形狀逐漸恢復成圓形或橢圓形，生精細胞數(shù)量增多。 3.2甲狀腺機能減退組：第7天、14天、21天HE染色均未觀察到LCs；生精小管破壞，生精細胞缺失。 3.3對照組：第7天、14天未觀察到LCs，生精小管和生精細胞的變化與甲狀腺機能減退組類似。第21天可見新生的LCs，細胞形態(tài)同甲狀腺機能亢進組類似，生精小管和生精細胞也逐漸恢復。 結論：1甲狀腺機能亢進組大鼠在EDS

8、處理后的第14天、21天睪丸3β-HSD陽性細胞數(shù)明顯高于甲狀腺機能減低組和對照組，表明T3可促進EDS處理后LCs的再生。 2甲狀腺機能亢進組大鼠在EDS處理后的第14開始出現(xiàn)新生的LCs，第21天睪丸間質中出現(xiàn)大量LCs，生精小管、生精細胞基本恢復至正常狀態(tài)，表明T3不但可以促進EDS處理后LCs的再生，進而可促進生精細胞的恢復。 3甲狀腺機能亢進組大鼠，在EDS處理后的第14天、21天睪丸組織體外培養(yǎng)孵育液和血清中