豬胸膜肺炎放線桿菌PCR檢測和分型系統(tǒng)的建立及應用.pdf

1、1 胸膜肺炎放線桿菌三種PCR檢測方法的評估 血清學診斷方法是常用的App檢測手段，但該法應用受到許多方面的限制。近15年來，App PCR檢測方法已有許多報道，本實驗通過特異性實驗、敏感性實驗、樣品的直接檢測等方面，對從已報道的PCR方法中篩選出的3種即apx-PCR、omlA-PCR、epx-PCP進行了比較，并確定cpx-PCR作為較適合本實驗室的最佳檢測方法。 2 胸膜肺炎放線桿菌PCR快速分型系統(tǒng)的建立及初步臨

2、床應用 根據外膜蛋白基因中間部分的差異，毒素基因和莢膜基因的型特異性，建立3個多重PCR的分型體系，可將App1～12型分成11個模式，除9型和11型外完全區(qū)分。此分型體系用于臨床分離株JS3，ZJ5和JS7的分型，得出的結果和血清學分型一致。對人工發(fā)病豬扁桃體和肺臟各12份，鼻拭子8份，-20℃保存一年的人工發(fā)病豬扁桃體和肺臟各3份分型結果與已知血清型一致。從20份臨床可疑病料中檢測出2份陽性，均為7型。從健康豬扁桃體250份

3、中檢測出3份陽性，一份為4型，一份為12型，一份為3型。 3 豬胸膜肺炎放線桿菌毒素Ⅰ和Ⅲ基因的串連表達及序列分析 參照GenBank中的App血清8型和10型菌株序列分別設計了一對特異性引物，用PCR方法擴增毒素Ⅰ(ApxⅠ)基因5’端部分基因，得到1047bp的片段，毒素Ⅲ(ApxⅢ)基因3，端部分基因，得到868bp的片段，然后重疊延伸剪切術(SOE)將兩段PCR產物連接，將連接產物(apxⅠ-apxⅢ)克隆到pM