新生大鼠缺氧缺血性腦損傷ZO-1和occludin的動態(tài)變化研究.pdf

1、目的：
　　 本實驗制備新生大鼠缺氧缺血性腦損傷(HIBD)模型,觀察新生大鼠HIBD后腦組織緊密連接蛋白ZO-1 mRNA,occludin mRNA表達的動態(tài)變化,進一步探討缺氧缺血后新生大鼠腦水腫的發(fā)生機制和緊密連接蛋白ZO-1,occludin在缺氧缺血性腦損傷中的保護作用,為臨床新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)的早期診斷和早期干預提供新的途徑。
　　 方法：
　　 1.HIBD模型的制備:將48只新生7日

2、齡SD大鼠隨機分為假手術對照組、HIBD3 h、6h、24h、48 h、72h組,每組大鼠8只,行頸部正中切口切開頸部皮膚,分離結扎左側頸總動脈后,給予低氧(8％02,92％N2)處理2小時,制成HIBD模型。假手術組只予分離但不結扎左側頸總動脈,于手術恢復后24 h處死。同時觀察缺氧時動物行為變化。
　　 2.腦大體形態(tài)肉眼觀察:在實驗動物處死時注意觀察每只新生大鼠腦組織的大體形態(tài)變化。
　　 3.HE染色:每組兩只大

3、鼠結扎側腦組織進行HE染色,光鏡下觀察腦組織的病理形態(tài)變化。
　　 4.ZO-1 mRNA,occludin mRNA表達的檢測:每組6只新生大鼠結扎側腦組織采用Real-time Q-PCR方法測定ZO-1 mRNA,occludin mRNA的表達的動態(tài)變化。
　　 結果：
　　 1.實驗動物模型行為表現:術前48只新生大鼠行為能力正常,均能正常進食,假手術對照組未見行為異常表現；HIBD組經歷缺氧時出現嚴重

4、的行為異常。
　　 2.腦大體形態(tài)肉眼觀:假手術對照組新生大鼠大腦半球左右對稱,未見任何病理變化,24 h時腦組織蒼白、水腫明顯,體積稍大于對側,72 h時可看到結扎側半球局部出現液化壞死灶,甚至腦組織完全液化與硬腦膜粘連。
　　 3.組織學檢查結果:對照組未見變化,HIBD后神經元變性,壞死,丟失,同時膠質細胞增生。
　　 4.ZO-1 mRNA,occludin mRNA在腦組織中的表達水平變化:
　　

5、 ①ZO-1 mRNA的動態(tài)表達結果對照組大鼠ZO-1 mRNA表達水平較高,HIBD各組大鼠在經歷缺氧缺血后,3 h組表達開始下降,24 h組降至最低,此后逐漸上升,但在72 h組仍維持在較低水平。各個時間點均比對照組低,與對照組比有統(tǒng)計學意義(P<0.05),24 h組與HIBD其他組比較也均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 ②occludin mRNA的動態(tài)表達結果對照組大鼠occludin mRNA表達水平較高,H

6、IBD組大鼠在經歷缺氧缺血后,3 h組表達開始下降,24 h組降至最低,此后逐漸上升,但在72 h組仍維持在較低的水平。各個時間點均比對照組低,與對照組比有統(tǒng)計學意義(P<0.05),24 h組與HIBD其他組比較也均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 結論：
　　 1.新生大鼠HIBD模型制作成功。
　　 2.新生大鼠腦缺氧缺血后發(fā)生腦水腫。
　　 3.新生大鼠缺氧缺血性腦損傷后神經元變性壞死。