非經(jīng)典蛋白激酶PKCι在食管鱗癌中的作用機制研究.pdf

1、我們在前期工作中發(fā)現(xiàn)非經(jīng)典蛋白激酶PKCι(ProteinKinaseCiota，PKCiota)在食管鱗狀細胞癌（ESCC，以下簡稱食管鱗癌）中存在DNA水平的基因拷貝數(shù)擴增和蛋白水平的高表達。然而，PKCι在食管鱗癌細胞中的作用機制尚不清楚。在本項研究中，我們發(fā)現(xiàn)利用RNAi技術(shù)降調(diào)食管鱗癌細胞系PKCι的基因表達引起細胞凋亡，同時降調(diào)β-catenin蛋白水平；在PKCι表達被敲降的細胞中回復(fù)β-catenin蛋白的表達，可阻止降

2、調(diào)PKCι引起的細胞凋亡。說明PKCι通過β-catenin調(diào)控食管鱗癌細胞的生存。此外，我們還發(fā)現(xiàn)降調(diào)PKCι通過增加細胞內(nèi)的活性氧物質(zhì)水平(ROS)，增強食管鱗癌細胞的自噬水平。進一步的研究發(fā)現(xiàn)PKCι對β-catenin蛋白穩(wěn)定性的調(diào)控與細胞自噬相關(guān)：降調(diào)PKCι引起的β-catenin表達水平降低可以被自噬抑制劑所逆轉(zhuǎn)；自噬誘導(dǎo)劑可引起β-catenin蛋白水平降低；在自噬誘導(dǎo)劑存在的條件下，高表達PKCι蛋白阻止自噬誘導(dǎo)劑引起

3、的β-catenin蛋白降解。免疫沉淀實驗證明降調(diào)PKCι能夠增加多聚泛素化修飾的β-catenin蛋白，并增強β-catenin與自噬受體蛋白LC3的相互作用，從而促進β-catenin的自噬降解。在食管鱗癌腫瘤組織中檢測發(fā)現(xiàn)，PKCι蛋白的表達水平與β-catenin和經(jīng)典的自噬底物p62蛋白的累積正相關(guān)，說明PKCι在食管鱗癌組織中高表達與自噬水平的降低有關(guān)。
　　 為深入研究PKCι對β-catenin蛋白的自噬依賴性調(diào)

4、控，我們通過GST-pulldown技術(shù)尋找到一個與PKCι和LC3相互作用的蛋白Hsc70。分析發(fā)現(xiàn)Hsc70與p62和β-catenin也存在相互作用關(guān)系，構(gòu)成β-catenin蛋白自噬降解復(fù)合物，證明了PKCι對β-catenin的調(diào)控依賴于Hsc70。在PKCι降調(diào)的食管鱗癌細胞系中，泛素E3連接酶RNF111蛋白水平增加，而且RNF111與p62、Hsc70、β-catenin存在于同一復(fù)合物中，其負(fù)責(zé)促進β-catenin的