壓力超負(fù)荷通過(guò)血管緊張素受體致內(nèi)皮祖細(xì)胞功能障礙的機(jī)制研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:高血壓可導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能損傷,內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)在血管內(nèi)皮修復(fù)中發(fā)揮重要作用。本研究探討AT受體在機(jī)械牽張致EPC功能變化中的作用,闡明高血壓時(shí)EPC功能變化,及參與血管內(nèi)皮損傷及修復(fù)的可能機(jī)制。
   方法:分離人臍血單個(gè)核細(xì)胞,在血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)存在條件下培養(yǎng)7~8d得到EPC。第一部分實(shí)驗(yàn)將EPC隨機(jī)分對(duì)照組、AngⅡ組(10-6mol·L-1)、AngⅡ+替米沙

2、坦預(yù)處理組。半定量RT-PCR檢測(cè)EPC內(nèi)血管緊張素原(AGT)mRNA表達(dá)情況;血管緊張素受體AT1、AT2以及HIF1a、VEGF mRNA表達(dá)水平。第二部分實(shí)驗(yàn)將EPC隨機(jī)分為對(duì)照組、機(jī)械牽張組、機(jī)械牽張+替米沙坦預(yù)處理組、機(jī)械牽張+ACEI預(yù)處理組。MTT法檢測(cè)EPC增殖功能;Transwell遷移小室測(cè)定EPC遷移功能。半定量RT-PCR檢測(cè)機(jī)械牽張對(duì)EPCs AT1、HIF1a、VEGF mRNA表達(dá)水平的影響。Wester

3、n Blot觀察機(jī)械牽張對(duì)ERK活性的影響。
   結(jié)果:1)人臍/tEEPC表達(dá)血管緊張素Ⅱ受體(Atl受體、AT2受體),不表達(dá)血管緊張素原(AGT)。
   2)外源性AngⅡ作用后,EPC的AT1受體、AT2受體mRNA表達(dá)量較對(duì)照組顯著增加(p<0.05);替米沙坦干預(yù)后AT受體表達(dá)量明顯降低。
   3)外源性AngⅡ作用后,EPC的HIFla、VEGF mRNA表達(dá)量較對(duì)照組顯著降低(p<0.05)

4、。用替米沙坦預(yù)處理細(xì)胞后再用AngⅡ刺激,與單純AngⅡ刺激組比較,HIF1a、VEGF mRNA表達(dá)明顯增加。
   4)機(jī)械牽張組EPC的增殖能力較對(duì)照組顯著減弱(p<0.05)。
   5)替米沙坦預(yù)處理組EPC的遷移能力較機(jī)械牽張組顯著增強(qiáng)(p<0.05)。
   6)機(jī)械牽張可降低EPC AT1 mRNA表達(dá)水平,替米沙坦預(yù)處理的細(xì)胞AT1mRNA表達(dá)水平與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異。
   7)機(jī)械

5、牽張組EPC HIF1a、VEGF mRNA表達(dá)水平較對(duì)照組顯著降低(p<0.05);用替米沙坦預(yù)處理細(xì)胞后再機(jī)械牽張刺激,與單純機(jī)械牽張組比較,HIF1a、VEGF mRNA表達(dá)明顯增加。
   8)機(jī)械牽張組EPC磷酸化ERK水平較對(duì)照組顯著升高(p<0.05);用替米沙坦預(yù)處理細(xì)胞與單純機(jī)械牽張組比較,磷酸化ERK表達(dá)明顯降低。
   結(jié)論:人臍血EPC表達(dá)AT1受體,不表達(dá)血管緊張素原基因,機(jī)械牽張可不依賴Ang

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