血紅素氧合酶對長波紫外線導致人體皮膚角質(zhì)形成細胞損傷作用的初步研究.pdf

1、NI幺_I素氧合酶對長波紫外線導致人體皮膚角質(zhì)形成細胞損傷作用的初步研究重慶大學碩士學位論文(學術學位)學生姓名：許若頎指導教師：鐘莉教授專業(yè)：生物學學科門類：理學重慶大學生物工程學院二O一二年四月堊瘞_人堂堡堂垡迨塞中文摘要—————————————————————————————————————————————————————————————一!二=!!!蘭摘要背景：紫外線A(ultravioletA，UVA)照射皮膚可產(chǎn)生紅斑等急

2、性炎癥反應，導致皮膚光老化、皮膚光敏作用和多種皮膚疾病的發(fā)生，甚至誘發(fā)皮膚癌。血紅素氧合酶(hemeoxygenase，HO)是一種廣泛存在于機體內(nèi)的抗氧化酶，能保護多種組織和器官抵抗外界刺激引起的氧化損傷，但其在抵抗UVA照射引起的皮膚細胞損傷中的作用研究較少。目的：檢測不同劑量的UVA照射(100、250、500kJ／m2)對人體皮膚角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞)的氧化損傷作用；觀察Bachl(BTBandCNChomology1t

3、ranscriptionfactor)的抑制對不同劑量UVA照射(250、500kJ／m2)引起的HaCaT細胞損傷的影響，觀察HO缺失對生理劑量250kJ／m2UVA照射引起的HaCaT細胞損傷的影響，以探究Bachl和HO是否能調(diào)節(jié)UVA照射導致的細胞損傷。方法：①細胞培養(yǎng)：用含有10％體積胎牛血清的RMPI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)HaCaT細胞，接種于六孔板、培養(yǎng)皿或96孔板中。②紫外線照射：根據(jù)實驗設計定時定量照射培養(yǎng)細胞，并分別于U

4、VA照射前進行基因干擾預處理。③細胞形態(tài)檢測：用鬼筆環(huán)肽和DAPI對各組HaCaT細胞進行細胞染色，并在熒光顯微鏡下觀察細胞骨架和細胞核。④細胞活性檢測：采用MTS法檢測各實驗組HaCaT細胞的增殖活性。⑤細胞活性氧族(reactiveoxygenspecies，ROS)水平檢測：熒光探針DHE染色檢測各組HaCaT細胞內(nèi)的ROS水平。⑥細胞DNA損傷檢測：運用單細胞凝膠電泳法檢測各實驗組HaCaT細胞的DNA損傷。結果：①不同劑量UV

5、A照射對HaCaT細胞損傷的影響：與未照射組細胞相比，小劑量100kJ／m2UVA照射組細胞形態(tài)、細胞活性均無明顯的差異，細胞ROS水平微弱升高，細胞DNA損傷較輕；生理劑量250kJ／m2UVA照射組細胞出現(xiàn)輕微皺縮和少量細胞碎片，細胞存活率明顯下降，細胞ROS水平和細胞DNA損傷明顯增加，差異有統(tǒng)計學意義(p005)；大劑量500kJ／m2UVA照射組細胞受損傷情況較為嚴重，與250kJ／m2UVA照射組相比，細胞皺縮情況和細胞碎片