化療藥物體外干預(yù)后MCF-7細(xì)胞株耐藥基因表達(dá)情況及其在臨床化學(xué)治療中的意義.pdf

1、目的：體外評(píng)價(jià)蒽環(huán)類及紫杉類化療藥物與乳腺癌耐藥相關(guān)基因MDR1和BCRP表達(dá)的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1，體外培養(yǎng)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞并將其接種入無(wú)菌細(xì)胞培養(yǎng)板，給予不同濃度阿霉素，表阿霉素，紫杉醇和多西紫杉醇分別干預(yù)MCF-7細(xì)胞不同時(shí)間后，采用RT－PCR檢測(cè)及PCR產(chǎn)物電泳分析方法檢測(cè)MDR1，BCRP基因的表達(dá)水平。
　　 2，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)一步檢測(cè)不同濃度阿霉素和表阿霉素干預(yù)不同時(shí)間段

2、后MDR1、BCRP基因的表達(dá)量，并評(píng)價(jià)蒽環(huán)類藥物干預(yù)濃度和干預(yù)時(shí)間與以上基因表達(dá)間的量效關(guān)系。
　　 3，以華中科技大學(xué)附屬協(xié)和醫(yī)院乳腺甲狀腺外科在2004年1月～2005年12月期間接受“乳腺癌改良根治術(shù)”并進(jìn)行體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)的乳腺癌患者為研究對(duì)象，根據(jù)藥敏結(jié)果分別篩選對(duì)蒽環(huán)類藥物高度敏感和對(duì)蒽環(huán)類藥物耐藥的乳腺癌組織標(biāo)本，檢測(cè)其中MDR1、BCRP基因表達(dá)量的差異及其在臨床中的意義。
　　 4，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢

3、測(cè)在不同濃度阿霉素干預(yù)后MCF-7中干細(xì)胞的比例，并分別檢測(cè)各主要亞細(xì)胞群中MDR1基因表達(dá)量的變化，探討多藥耐藥形成中的可能機(jī)制。
　　 結(jié)果：蒽環(huán)類藥物干預(yù)與乳腺癌細(xì)胞MCF-7的MDR1基因表達(dá)量間有密切關(guān)系，MDR1基因隨蒽環(huán)類藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)量也隨之增加。而蒽環(huán)類藥物與BCRP基因間及紫杉類藥物與MDR1，BCRP間都無(wú)明顯的量效關(guān)系。蒽環(huán)類藥物干預(yù)后的乳腺癌細(xì)胞MCF-7的BCRP基因的表達(dá)無(wú)明

4、顯規(guī)律，紫杉類藥物干預(yù)后的MCF-7的MDR1和BCRP基因的表達(dá)量也無(wú)明顯差異。此外，對(duì)比兩種蒽環(huán)類藥物干預(yù)后的MCF-7細(xì)胞中MDR1及BCRP基因的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)兩種藥物間無(wú)顯著差異。且在體外藥敏中對(duì)蒽環(huán)類藥物高度敏感的腫瘤組織中MDR1的表達(dá)量要明顯低于對(duì)蒽環(huán)類藥物耐藥的腫瘤組織。此外，對(duì)照流式細(xì)胞分選結(jié)果和相應(yīng)細(xì)胞亞群MDR1基因水平，發(fā)現(xiàn)隨著阿霉素藥物干預(yù)濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，MCF-7細(xì)胞中干細(xì)胞池出現(xiàn)富集現(xiàn)象，同時(shí)，

5、CD44+CD24－和CD44+CD24+兩亞細(xì)胞群中，MDR1基因的表達(dá)水平也隨之增高。
　　 結(jié)論：該研究結(jié)果證實(shí)了蒽環(huán)類藥物是MDR1基因編碼產(chǎn)物p-gp蛋白的特異性底物之一。臨床通過(guò)檢測(cè)MDR1的表達(dá)量可以較準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)蒽環(huán)類藥物的療效，并為個(gè)體化的選擇敏感性藥物提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。且兩種蒽環(huán)類藥物（阿霉素及表阿霉素）在體外誘導(dǎo)MDR1基因表達(dá)的能力方面無(wú)明顯差異。同時(shí)，乳腺癌多藥耐藥的形成不僅僅是基于腫瘤干細(xì)胞選擇性的存