實驗性咬合創(chuàng)傷及牙周炎大鼠牙周組織中血管內(nèi)皮生長因子的表達變化及意義.pdf

1、目的:本實驗通過建立咬合創(chuàng)傷和牙周炎動物模型，采用免疫組化技術，觀察在不同時間內(nèi)血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)的動態(tài)表達變化，推測咬合創(chuàng)傷在牙周組織損傷及修復過程中的作用機理，分析與咬合創(chuàng)傷相關的疾病的發(fā)生機制，為臨床工作中咬合創(chuàng)傷疾病的早期發(fā)現(xiàn)及治療提供更理想的思路。
　　 方法:選用120只雄性Wistar大鼠（由河北醫(yī)科大學動物實驗中心提供），清潔級，口腔衛(wèi)生狀

2、況良好，咬合關系良好，無口腔疾病，體重250g-280g，鼠齡為3個月。將大鼠隨機分為四組，分別為N組（正常對照組）、A組（咬合創(chuàng)傷組）、B組（牙周炎組）、C組（咬合創(chuàng)傷+牙周炎組），每組30只，分別于建模后1天、3天、7天、2周、4周、6周從各組中隨機選5只處死取材。采用濃度為100g/L的水合氯醛（3ml/Kg）腹腔注射麻醉，將大鼠仰臥固定于操作臺上，用1％碘酊棉簽、75％乙醇消毒雙側(cè)口腔黏膜。A組隨機選取一側(cè)上頜第一磨牙為實驗牙，

3、選用直徑0.6mm的方絲，截取長度約2mm。用金剛砂小球鉆將咬合面打磨粗糙，隔濕后涂布酸蝕劑，酸蝕30-60秒，用水沖去，棉球隔濕，吹干后涂布粘接劑，光固化;復合樹脂將方絲粘接至咬合面后光固化。B組隨機選取一側(cè)下頜第一磨牙為實驗牙，選用直徑0.2mm結(jié)扎絲結(jié)扎于第一磨牙牙頸部，并盡量位于齦溝內(nèi)。C組按上述方法隨機選擇同側(cè)上下頜第一磨牙為實驗牙建模。N組不作任何處理。
　　 在各自規(guī)定的時間內(nèi)，實驗動物按0.3ml/100g劑量，

4、給予10％水合氯醛麻醉后，用4％多聚甲醛經(jīng)心灌注，待灌注結(jié)束后，立即截取磨牙區(qū)組織，保留根尖部骨板及牙齦組織，將樹脂材料及結(jié)扎絲去除，在4℃條件下于4％多聚甲醛溶液中固定48h，再置于10％EDTA溶液4℃環(huán)境中脫鈣4周。進行石蠟包埋并切片，切片厚5μm。對切片進行HE染色及VEGF免疫組織化學染色，封片后自然干燥。
　　 利用專業(yè)圖像分析系統(tǒng)ImagePro-Plus6.0軟件對VEGF免疫組織化學染色結(jié)果陽性細胞數(shù)進行數(shù)據(jù)采

5、集。應用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件采用Kruskal-WallisH檢驗對數(shù)據(jù)進行總體分析，Wilcoxon秩和檢驗對4個實驗組6個不同觀察期的免疫反應結(jié)果進行組間兩兩比較，按α=0.05水準，P≤0.05為結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義，反之，結(jié)果差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、H-E染色
　　 1.1、對照組大鼠磨牙冠狀切片顯示，牙周膜排列整齊，根尖牙周膜與牙骨質(zhì)連接緊密，牙槽骨與牙周膜界限明顯，少數(shù)牙槽

6、骨表面可見陷窩，并有多核細胞分布。在牙周組織血管周圍也可見到有細胞分布。
　　 1.2、實驗組
　　 牙周膜內(nèi)部的成纖維細胞少量增多，纖維排列紊亂，牙槽骨表面陷窩增大，數(shù)目增多，在骨陷窩內(nèi)多核細胞數(shù)量增多，血管數(shù)量呈增多趨勢，在2周組達到高峰。
　　 2、VEGF免疫組織化學
　　 2.1、對照組
　　 在下頜磨牙的牙冠周圍的血管中未見陽性細胞，根尖周圍的牙槽骨表面均未見陽性細胞。在牙周膜的內(nèi)部，

7、只有少數(shù)大血管內(nèi)有少量VEGF陽性的細胞。
　　 2.2、實驗組
　　 VEGF陽性細胞分布具有以下幾個特點:(1)在實驗組中，牙周膜周圍的牙槽骨陷窩中出現(xiàn)VEGF陽性多核細胞且逐漸增多，VEGF陽性表達的血管數(shù)量逐漸增多，2周達到高峰，在4周，6周組表達有所降低。(2)在所有觀察期的切片中，整個磨牙列，包括第1，2，3磨牙牙槽骨都可見骨陷窩中有VEGF陽性多核細胞分布，并在牙槽骨內(nèi)的血管中有陽性細胞分布，集中于實驗牙根

8、尖周圍;實驗牙牙冠牙周組織及實驗牙的鄰牙牙周組織中，未見明顯陽性細胞分布。(3)對于不同實驗組來說，相同觀察期的VEGF免疫組化結(jié)果顯示，骨陷窩中VEGF免疫陽性多核細胞數(shù)目及牙周膜中血管的陽性細胞的數(shù)目在各組之間比較:對照組＜牙周炎組＜咬合創(chuàng)傷組＜咬合創(chuàng)傷+牙周炎組。
　　 結(jié)論:
　　 1、VEGF在各個實驗組牙周組織中的表達，咬合創(chuàng)傷+牙周炎組中VEGF在多個核細胞和牙周組織血管內(nèi)皮細胞中的表達強于其他兩組，表明其