RPA等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf

1、隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的不斷創(chuàng)新，越來(lái)越多新型轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品相繼問(wèn)世。轉(zhuǎn)基因玉米在產(chǎn)量、品質(zhì)等方面得到了提高，作為重要的糧食和飼料作物，從1996年到2016年間全球轉(zhuǎn)基因玉米種植面積從30萬(wàn)公頃增加到了6060萬(wàn)公頃。于此同時(shí)，社會(huì)公眾對(duì)于轉(zhuǎn)基因玉米的關(guān)注度也在不斷地提高，各國(guó)相繼出臺(tái)了法律法規(guī)對(duì)轉(zhuǎn)基因玉米等轉(zhuǎn)基因作物進(jìn)行監(jiān)管。為了加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因玉米的安全管理，保護(hù)消費(fèi)者大眾的權(quán)益，迫切需要對(duì)于轉(zhuǎn)基因玉米建立快速檢測(cè)新方法。傳統(tǒng)檢測(cè)方法以PCR技術(shù)為

2、主，但由于PCR技術(shù)本身存在反應(yīng)時(shí)間久、成本高、對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境要求高、程序繁瑣等缺點(diǎn)，越來(lái)越多的研究開始放眼于恒溫快速檢測(cè)上。恒溫檢測(cè)技術(shù)不但擺脫了變溫儀，而且在保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確的前提下，極大的縮短了反應(yīng)時(shí)間。RPA(recombinase polymeraseamplification)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)是在重組酶介導(dǎo)下模擬細(xì)胞的DNA復(fù)制過(guò)程，在體外進(jìn)行核酸等溫?cái)U(kuò)增的新技術(shù)。在37-42℃間，20分鐘內(nèi)就可以對(duì)含有靶標(biāo)序列的樣品進(jìn)行擴(kuò)增，在配

3、備便攜式RPA檢測(cè)儀器能實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因玉米的田間快速檢測(cè)。到目前為止，我國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)的轉(zhuǎn)基因玉米包括3272、59122、Bt176、Bt11、GA21、MIR162、MIR604、MON810、MON863、MON88017、MON89034、NK603、T25和TC1507，本實(shí)驗(yàn)以上述轉(zhuǎn)基因玉米品系為實(shí)驗(yàn)材料，旨在建立一批轉(zhuǎn)基因玉米品系特異性RPA熒光檢測(cè)方法，主要研究?jī)?nèi)容以及結(jié)果如下:
　　1.建立了轉(zhuǎn)基因玉米R(shí)PA熒光檢測(cè)方法

4、。本研究根據(jù)每種轉(zhuǎn)基因玉米外源插入片段側(cè)翼序列設(shè)計(jì)引物和探針，通過(guò)篩選得到最優(yōu)探針以及引物對(duì)建立RPA熒光檢測(cè)方法。已建立了包含Bt11、Bt176、TC1507、MON810、MON863和MON89034在內(nèi)的6種轉(zhuǎn)基因玉米的RPA熒光檢測(cè)方法，占已批準(zhǔn)轉(zhuǎn)基因玉米43％。上述材料的RPA熒光檢測(cè)方法具有很高的靈敏性與特異性，可在20分鐘產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果，檢出限可達(dá)到到50個(gè)拷貝。此結(jié)果為轉(zhuǎn)基因玉米快速檢測(cè)提供了方法支撐。
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