

版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:觀察姜黃素對體外培養(yǎng)的人外周血內皮祖細胞(EPCs)功能及內皮型一氧化氮合酶的影響。探索體外擴增內皮祖細胞數量及增強內皮祖細胞功能的藥物方法。 方法:采用密度梯度離心法分離人外周血單個核細胞(MNCs)。將所得MNCs接種到事先包被纖維連接蛋白的培養(yǎng)瓶里,加入5ml含10%胎牛血清的M199培養(yǎng)液。培養(yǎng)3天后,PBS液洗去未貼壁細胞,貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng),每3天換全液,培養(yǎng)第6天的細胞用于實驗。采用標記的乙酰化低密度脂蛋白(D
2、iI-ac-LDL)攝取試驗和荊豆凝集素(FITC-UEA-1)結合實驗,以及CD34、flk-1和Ⅷ因子相關抗原免疫組化染色體外血管形成試驗對內皮祖細胞進行鑒定。 收集內皮祖細胞并分成4組,分別加入姜黃素(0、5、10、15μmol/L)培養(yǎng)一定時間(6、12、24和48h)。分別采用流式細胞儀檢測其數量,CCK-8法檢測增殖能力,培養(yǎng)計數法檢測粘附能力,改良的Boyden小室檢測遷移能力,采用體外血管形成試劑盒檢測EPCs血
3、管生成能力,Griess法檢測NO分泌量及RT-PCR測定eNOS基因表達。所得數據均采用均數±標準差(x±S)表示,組間比較采用T檢驗,單因素方差分析(ANOVA),P<0.05為有顯著差異。 結果: 1.EPCs培養(yǎng)及鑒定 密度梯度離心法分離得到人外周血單個核細胞,培養(yǎng)3天洗去未貼壁的細胞,可以見到典型的細胞集落以及圓形或不規(guī)則形狀的貼壁細胞。典型的集落形態(tài)為:中間為大量的圓形細胞,層層疊疊,外周為梭形細胞,
4、向外放射狀擴散。培養(yǎng)3-7天,絕大多數細胞逐漸分化為梭形細胞,出現條索樣或軌道樣結構。培養(yǎng)7天左右細胞生長至融合狀態(tài)給予傳代處理,20天左右細胞形成典型的鋪路石樣排列,表現為成熟內皮細胞的形態(tài)特點。 流式細胞術鑒定:人外周血單個核細胞培養(yǎng)6天后流式細胞術分析示CD34陽性細胞比例為(73.13±8.51)%,VE-Cadherin陽性細胞比例為(62.65±10.90)%,KDR(VEGFR-2)陽性細胞比例為(7.16±1.3
5、1)%,CD133陽性細胞比例為(5.15±2.15)%,CD34、VE-Cadherin雙陽性細胞比例為(60.17±9.47)%,KDR、VE-Cadherin雙陽性細胞比例為(5.71±0.74)%,CD34、CD133雙陽性細胞比例為(3.87±0.40)%,KDR(VEGFR-2)、CD133雙陽性細胞比例為(4.49±0.55)%。 EPCs雙染色實驗:通過熒光倒置顯微鏡鑒定,吞噬DiI-ac-LDL的細胞激發(fā)紅色熒
6、光,結合FITC-UEA-Ilectin的細胞激發(fā)綠色熒光,為正在分化的EPCs。空白對照組EPCs不顯色。 培養(yǎng)兩周后細胞Ⅶ因子相關抗原免疫組化陽性,胞漿呈棕黃色,一抗以PBS替代的空白對照不顯色,作為對照的胃癌細胞也不顯色。 2、不同濃度姜黃素對體外培養(yǎng)的內皮祖細胞數量及功能的影響 姜黃素與內皮祖細胞體外共培養(yǎng)24小時后實驗顯示:與對照組相比,姜黃素(5、10、15μmol/L)增加外周血EPCs的數量,分別
7、為(50±9)、(60±11)、(85±13)、(125±10),組間相比有顯著差異(P<0.01);改善EPCs的體外增殖能力,分別為(0.841±0.247)、(0.905±0.050)、(0.933±0.119)、(0.950±0.010),組間相比有顯著差異(P<0.05);改善其粘附能力,分別為(30.3±0.5)、(33.6±1.70)、(34.0±2.7)、(36.3±3.50),組間相比有顯著差異(P<0.05);改善其
8、遷移能力,分別為(12.3±0.5)、(13.8±1.5)、(15.8±2.6)、(19.5±3.3),組間相比有顯著差異(P<0.01);促進其體外血管生成能力,分別為(22.2±5.1)、(31.2±2.5)、(40.3±6.5)、(45.1±3.0),組間相比有顯著差異(P<0.01);姜黃素呈時間依賴性促進EPCs來源的NO的釋放(P<0.01);并上調eNOS基因表達,與對照組mRNA相比,不同姜黃素組比值分別為(150±5)
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 一氧化氮合酶基因轉染小鼠內皮祖細胞實驗研究.pdf
- 葡萄糖對血管內皮細胞一氧化氮釋放及內皮型一氧化氮合酶活性的影響.pdf
- 煙霧暴露大鼠肺血管內皮型一氧化氮合酶及一氧化氮的表達變化.pdf
- 內皮素-1和一氧化氮-一氧化氮合酶與Eales病的相關研究.pdf
- 兔股靜脈延遲移植內皮素一氧化氮一氧化氮合酶基因表達變化的研究.pdf
- 內含子27堿基miRNA對內皮一氧化氮合酶調控機制的研究.pdf
- 一氧化氮與一氧化氮合酶對心肌的保護作用.pdf
- 高濃度胰島素對培養(yǎng)的人臍靜脈內皮細胞一氧化氮產生及一氧化氮合酶表達的影響.pdf
- 兔腦一氧化氮合酶陽性神經元分布及一氧化氮合酶活性的研究.pdf
- TRPV4在機械牽張人腦微血管內皮細胞中對內皮型一氧化氮合酶的作用.pdf
- 人脂肪干細胞對急性肺損傷大鼠肺內皮型一氧化氮合酶的影響.pdf
- 冠心病患者內皮型一氧化氮合酶脫偶聯與內皮功能障礙的關系.pdf
- 外周血內皮祖細胞數量及動脈內皮型一氧化氮合酶基因表達在動脈粥樣硬化大鼠中的改變.pdf
- 流體剪切力對肺動脈內皮細胞一氧化氮合酶表達的影響.pdf
- 糖基化終產物對血小板內皮型一氧化氮合酶活性的影響.pdf
- 一氧化氮、一氧化氮合酶與卵巢良、惡性腫瘤及細胞凋亡的關系.pdf
- 地塞米松對哮喘小鼠體內一氧化氮、一氧化氮合酶作用的實驗研究.pdf
- 一氧化氮及一氧化氮合酶在變應性鼻炎中的作用.pdf
- 內含子源性27堿基microRNA對內皮型一氧化氮合酶表達影響及其分子機制研究.pdf
- microRNA-24對內皮型一氧化氮合酶表達調節(jié)及血管內皮細胞增殖的影響及相關機制研究.pdf
評論
0/150
提交評論