白細胞介素32與阿爾茨海默病關(guān)聯(lián)性研究.pdf

1、目的：通過用Aβ處理人膠質(zhì)瘤細胞株U251細胞，觀察IL-32在U251中表達情況，并通過檢測TNF-α的表達量分析IL-32與TNF-α的關(guān)系，以期對阿爾茨海默病的炎癥機制研究提供參考作用。
　　方法：血清饑餓法處理U251細胞，用不同濃度Aβ42（0ug/ml、5ug/ml、10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml，40ug/ml）刺激U251，MTS測存活率，選擇半數(shù)存活率濃度作為最適濃度用于后續(xù)實驗。用最適濃度Aβ處

2、理U2510h、6h、12h及24h，提取各組細胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，利用Real-time PCR方法檢測IL-32和TNF-αmRNA表達水平；提取各組細胞總蛋白，Western blot法檢測IL-32和TNF-α蛋白表達量。
　　結(jié)果：Real-time PCR檢測結(jié)果顯示：IL-32 mRNA表達水平及TNF-αmRNA表達水平均升高，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01，vs control）。與TNF-α相比，各

3、組IL-32mRNA表達量均比TNF-α高（P＜0.01），且藥物處理組IL-32變化較TNF-α更顯著（P＜0.01）。Western blot法檢測結(jié)果顯示，與正常組相比，30ug/ml濃度的Aβ作用于U251細胞6h、12h，24h時IL-32蛋白水平均有顯著增高（6h：P＜0.05，12h和24h：P＜0.01），TNF-α蛋白水平亦有顯著上調(diào)趨勢（6h：P＜0.05，12h和24h：P＜0.01）。與TNF-α相比，各組IL-

4、32的蛋白表達量均較低。通過pearson相關(guān)性分析示，相同濃度不同時間Aβ處理的U251細胞中IL-32與TNF-αmRNA基因及蛋白表達水平均呈顯著正相關(guān)（mRNA：r=0.965，P＜0.001，蛋白質(zhì)：r=0.946，P＜0.001）。
　　結(jié)論：1. IL-32可能與阿爾茨海默病免疫炎癥發(fā)病機制相關(guān)；2.在一定時期內(nèi)，阿爾茨海默病患者病程越長，其腦內(nèi)IL-32表達量越多；3.IL-32表達量與TNF-α的表達量有顯著相關(guān)