電脈沖介導表達EGFRvⅢDNA免疫預防小鼠顱內腫瘤研究.pdf

1、編碼腫瘤特異性抗原蛋白的DNA疫苗不僅能誘導機體產生特異性抗腫瘤的CD8+ T細胞的免疫應答,而且還能誘導機體產生體液免疫,從而顯示出抗腫瘤免疫的優(yōu)勢。對于顱內腫瘤來說編碼腫瘤特異性抗原蛋白的DNA免疫不僅可以減少自身免疫的風險,還能精確地消除表達特異性抗原的腫瘤細胞。然而,裸DNA的免疫誘導能力極差,需要借助其他的載體或物理輸送方法來提高其免疫效果。電脈沖是目前最為有效的質粒DNA物理輸送方法,而且還能提高DNA疫苗的免疫應答效果。<

2、br>　　腫瘤特異性抗原蛋白,表皮生長因子受體突變體Ⅲ(EGFRvⅢ)是腦膠質瘤最常見的突變體抗原之一。本文中以EGFRvIII為抗原蛋白構建DNA疫苗,并利用電脈沖介導DNA疫苗免疫小鼠,驗證該DNA疫苗的免疫誘導能力及抑制EGFRvIII陽性腫瘤細胞在顱內成瘤和生長的效果。我們首先克隆并構建了EGFRvIII的表達質粒;經脂質體轉染B16F10細胞后篩選穩(wěn)定表達該蛋白的細胞株(B16F10-EGFRvIII),并用蛋白印跡及細胞免疫

3、化學方法進行驗證;將DNA疫苗用電脈沖方法免疫小鼠并用CTL檢測DNA疫苗的免疫效果;免疫小鼠皮下和顱內接種腫瘤細胞,驗證電脈沖DNA免疫對腫瘤形成和生長的抑制效果。
　　研究結果表明我們構建的重組質粒能高效表達EGFRvIII;篩選所得穩(wěn)轉細胞株,EGFRvIII能正確的表達和定位;與未免疫組相比,電脈沖介導DNA疫苗免疫能誘導更顯著的細胞免疫應答(p<0.05),并顯示對皮下和顱內腫瘤的形成和生長有明顯的抑制效果(s.c.,