

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物1(mTORC1,mammalian target of rapamycincomplex1)的激活不僅能促進蛋白質(zhì)的合成,還能抑制自噬等蛋白質(zhì)的降解途徑的發(fā)生。氨基酸尤其是亮氨酸不僅是蛋白質(zhì)合成的原料,也能作為信號分子參與mTORC1的激活過程。近年來,越來越多的蛋白被發(fā)現(xiàn)參與氨基酸激活mTORC1的過程。然而,關(guān)于氨基酸在細胞內(nèi)的感應(yīng)機制尚不明確,細胞中還可能存在其它未知的蛋白質(zhì)分子參與氨基酸激活mTOR
2、C1的過程。
本研究通過構(gòu)建用于研究mTORC1信號通路的無細胞體系(Cell-freesystem),結(jié)合同位素標記相對和絕對定量iTRAQ(isobaric tags for relative andabsolute quantification)技術(shù)及生物信息學分析,初步篩選參與亮氨酸調(diào)節(jié)mTORC1信號通路的關(guān)鍵差異候選蛋白質(zhì)。本研究的無細胞體系由溶酶體粗提物(包括P20(+)和P20(-))、胞漿蛋白(包括S100(
3、+)和S100(-))、純化的標簽蛋白HA-raptor(mTORC1的組分之一)組成。無細胞體系結(jié)果表明,在由胞漿蛋白S100(-)和溶酶體粗提物P20(-)組成的無細胞體系中,亮氨酸能促進Raptor與溶酶體P20(-)的結(jié)合。無細胞體系反應(yīng)完成后,我們將對照組的上清和沉淀(S1,P1)與亮氨酸組的上清和沉淀(S2,P2)進行iTRAQ試驗。本次iTRAQ試驗共鑒定到6292個蛋白,以變化倍數(shù)(Fold change)>1.2或<0
4、.83和Q值(Q-value)<0.05兩個條件進行差異蛋白的篩選。在P2-VS-P1組中,上調(diào)差異蛋白數(shù)(Up-regulated proteins)為208個,下調(diào)差異蛋白數(shù)(Down-regulatedproteins)為190個;在S2-VS-S1組中,上調(diào)差異蛋白數(shù)(Up-regulated proteins)為12個,下調(diào)差異蛋白數(shù)(Down-regulated proteins)為3個。對上述差異蛋白進行生物信息學分析(包
5、括GO、COG注釋、Pathway注釋分析)后發(fā)現(xiàn),差異蛋白主要為細胞器上參與代謝過程的蛋白,且參與脂質(zhì)代謝和與神經(jīng)退行性疾病相關(guān)的蛋白也可能參與亮氨酸對mTORC1的激活過程。
參與亮氨酸激活mTORC1信號通路的關(guān)鍵差異候選蛋白需要綜合考慮上清和沉淀中的差異蛋白。其中,在上清中下調(diào)且在沉淀中上調(diào)的蛋白數(shù)為0,而在上清中上調(diào)且在沉淀中下調(diào)的蛋白有6個,因而我們初步將這6個蛋白(APOA1、CFH、FGA、ERH、CANX、F
6、2)定義為參與亮氨酸激活mTORC1信號通路的關(guān)鍵差異候選蛋白。對CANX進行初步驗證后發(fā)現(xiàn),無細胞體系樣品中該蛋白的分布規(guī)律與iTRAQ數(shù)據(jù)一致,且CANX與溶酶體上的標志性蛋白Lamp2的共定位結(jié)果也說明亮氨酸能促進CANX向細胞質(zhì)中遷移。
綜上所述,(1)本研究首次成功構(gòu)建了用于研究亮氨酸調(diào)節(jié)mTORC1信號通路的無細胞體系,且該體系有效性好,穩(wěn)定性高。(2) iTRAQ數(shù)據(jù)與生物信息學分析結(jié)果表明,APOA1、CFH、
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 利用無細胞體系和iTRAQ鑒定參與亮氨酸調(diào)節(jié)自噬通路的關(guān)鍵候選蛋白質(zhì).pdf
- 基于蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)與蛋白質(zhì)功能的關(guān)鍵蛋白質(zhì)預(yù)測研究.pdf
- 46008.大腸桿菌無細胞體系合成異源蛋白質(zhì)的初探
- 蛋白質(zhì)生物合成
- HBx編碼蛋白質(zhì)通過調(diào)節(jié)SPRY1編碼蛋白質(zhì)激活MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路研究.pdf
- 蛋白質(zhì)的生物合成
- 大腸桿菌無細胞體系高通量合成蛋白質(zhì)的探索性研究.pdf
- 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)骨架柔性對接研究.pdf
- 應(yīng)用蛋白質(zhì)組學方法篩選乳腺癌相關(guān)蛋白質(zhì).pdf
- 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)對接方法的研究.pdf
- 蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物結(jié)構(gòu)預(yù)測.pdf
- 基因指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成
- 蛋白質(zhì)的生物合成翻譯
- 蛋白質(zhì)的合成與運輸
- 泛素調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解途徑
- 氨基酸蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)纖維
- 利用蛋白質(zhì)芯片技術(shù)檢測膜性腎病腎組織蛋白質(zhì).pdf
- 蛋白質(zhì)設(shè)計及蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)模型的研究.pdf
- 亮氨酸及α-酮異己酸鈣對綿羊機體蛋白質(zhì)合成的影響研究.pdf
- 蛋白質(zhì)總結(jié)
評論
0/150
提交評論