微波復(fù)溫在胚腦細(xì)胞玻璃化凍存過程中的作用研究.pdf

1、該文以孕17~19天的SD大鼠為實驗材料,對胚腦進(jìn)行玻璃化冷凍保存,主要研究微波復(fù)溫是否比常規(guī)復(fù)溫更能保持細(xì)胞的生物學(xué)功能.實驗共分為三部分:第一部分為微波參數(shù)的篩選.使用不同功率、不同方法對玻璃化凍存的溶液進(jìn)行復(fù)溫,選擇合適的微波復(fù)溫方式.第二部分,篩選出與微波參數(shù)匹配的適合于胚腦細(xì)胞的玻璃化溶液.第三部分,對玻璃化凍存的胚腦細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行檢測,分析影響復(fù)溫后胚腦細(xì)胞活力的因素,同時比較常規(guī)水浴復(fù)溫與微波復(fù)溫的效果.微波復(fù)溫參數(shù)篩

2、選:經(jīng)玻璃化冷凍的2ml玻璃化溶液,直接使用2450MHz微波復(fù)溫,實驗表明功率越低復(fù)溫時間越長,以800W功率的微波復(fù)溫需165秒,復(fù)溫速率為71.27℃/min;38℃水浴復(fù)溫只需100秒,復(fù)溫速率為117.6℃/min;將樣品放入10℃的300ml水浴中進(jìn)行微波復(fù)溫可以加快復(fù)溫速率,復(fù)溫時間為80s,復(fù)溫速率達(dá)147℃/min.因此選用10℃的300ml水浴中進(jìn)行微波復(fù)溫較為合適.玻璃化溶液的篩選:從胚腦細(xì)胞的回收率、存活率和琥珀

3、酸脫氫酶(SDH)活性的變化看,無論是水浴復(fù)溫還是微波復(fù)溫,玻璃化溶液VS2比VSl對胚腦細(xì)胞的凍存效果更好.VS2的成份為:20.5%(W/V)DMSO,15.5%(W/V)乙酰胺,10%(W/V)2,3-丁二醇和6%(W/V)蔗糖.胚腦細(xì)胞玻璃化凍存后的功能變化:隨著凍存時間的延長,細(xì)胞回收率、存活率都有下降的趨勢,30天后保持基本穩(wěn)定,與第60天比較無顯著差異(P>0.05).胚腦細(xì)胞玻璃化凍存前期(3~30天)的檢測結(jié)果表明,胚

4、腦細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>含量顯著增加,SDH和超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著降低,而玻璃化凍存后期(30~60天)H<,2>O<,2>含量、SDH和SOD活性趨于穩(wěn)定.水浴組與微波組的復(fù)溫效果比較:從細(xì)胞的回收率來看,兩種復(fù)溫方法的效果大致相同,沒有顯著的差異.微波復(fù)溫組的細(xì)胞存活率,細(xì)胞內(nèi)SDH酶、SOD酶的活性高于水浴復(fù)溫組.同時,微波復(fù)溫組的細(xì)胞內(nèi)H<,2>O<,2>含量明顯低于水浴復(fù)溫組.表明微波復(fù)溫對胚腦細(xì)胞的損傷要低于