磷酸化蛋白質組學技術平臺建立及其初步應用.pdf

1、本文論述了磷酸化蛋白質組學技術平臺建立及其初步應用。 磷酸化作為生物體內最重要的蛋白質翻譯后修飾之一，在細胞信號傳遞中占有極重要的地位。而磷酸化修飾研究中最主要的限速點就是低豐度磷酸化蛋白的鑒定。 本文在先前建立的表達蛋白質組學技術平臺基礎上，進一步以高靈敏度的4700質譜儀為依托，建立了一套磷酸化蛋白質組學研究的技術平臺，并將其初步應用于PKCδ磷酸化底物的識別研究中。 首先，基于MALDI-TOF-TOF 質

2、譜儀，以標準磷酸化肽和標準磷酸化蛋白評估各種檢測磷酸肽的方法：反射模式譜圖中通過磷酸化亞穩(wěn)態(tài)離子峰辨識磷酸肽；負離子模式和銨鹽對于磷酸肽的質譜效應；固相金屬親和色譜（IMAC）對磷酸肽的富集；堿性磷酸酶法證實磷酸肽；串聯(lián)質譜結合數(shù)據庫檢索鑒定磷酸化位點。 其次，利用商品化的磷酸化蛋白富集柱富集分離磷酸化蛋白，結合高分辨率的雙相電泳和特異結合磷酸化蛋白的熒光染料，實現(xiàn)了基于凝膠電泳的差異磷酸化蛋白質組學。 最后，利用所建