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文檔簡介
1、目的: 通過觀察不同濃度的利多卡因對LPS誘導的體外培養(yǎng)大鼠腹腔巨噬細胞HMGB1 mRNA表達和蛋白釋放的影響,探討利多卡因的抗炎作用機制,為膿毒癥的臨床治療提供理論參考。 方法: 取雄性Wistar大鼠腹腔巨噬細胞,置6孔細胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)3~5天后,用LPS刺激,采用不同濃度的利多卡因進行干預。共分為5組。5組細胞均棄原培養(yǎng)液,用不含血清的培養(yǎng)液洗滌2遍后:(1)空白對照組(C組)加入無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液2.0m
2、l;(2)陽性對照組(LPS組)加入無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液1.980ml和濃度為10ng/ul的LPS 20ul,使LPS的終濃度為100ng/ml;(3)利多卡因1-3組(Lido1-Lido3組)在加入無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液1.960ml和濃度為10ng/ul的LPS 20ul后,再分別加入濃度為0.2ug/ul、2ug/ul、20ug/ul的利多卡因20ul,LPS的終濃度為100ng/ml,利多卡因的終濃度分
3、別為2ug/ml、20ug/ml、200ug/ml。5組細胞均于孵育箱中培養(yǎng)24h后收取細胞和細胞培養(yǎng)物上清。采用RT-PCR和ELISA分別檢測細胞HMGB1 mRNA的表達和細胞培養(yǎng)物上清HMGB1蛋白濃度。 結果: RT-PCR與ELISA結果顯示,與陽性對照組(LPS組)比較,不同濃度利多卡因組HMGB1 mRNA表達和HMGB1蛋白釋放均有不同程度減少,且呈劑量依賴性。利多卡因組1與LPS組的差異無統計學意義(p>0.
4、01),而利多卡因2組及利多卡因3與LPS組及利多卡因1組比較,差異均有統計學意義(p<0.01)。利多卡因2與利多卡因3組之間HMGB1 mRNA表達的差異也有統計學意義(p<0.01),但抑制HMGB1蛋白釋放的差異則無統計學意義(p<0.01)。 結論: 終濃度為20ug/ml,200ug/ml的利多卡因可明顯抑制LPS誘導的體外培養(yǎng)大鼠腹腔巨噬細胞HMGB1 mRNA的表達和蛋白釋放。這可能是利多卡因抗炎作用的機制之一。
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