大鼠心肌缺血后心臟β3腎上腺素能受體表達(dá)的改變.pdf

1、背景:β3腎上腺素能受體的基因在1989年就被成功克隆,早期研究發(fā)現(xiàn)β3腎上腺素能受體主要分布在脂肪組織。Gauthier等人在后來(lái)的研究中用PCR方法檢測(cè)到心臟有β3腎上腺素能受體mRNA存在。藥理學(xué)研究提示大鼠心肌中沒(méi)有β3腎上腺素能受體蛋白表達(dá),然而,Dincer等人的研究結(jié)果表明大鼠心肌有β3腎上腺素能受體表達(dá)。β3腎上腺素能受體在大鼠心肌缺血后心臟中的表達(dá)情況存在不同意見(jiàn),明確其表達(dá)對(duì)于進(jìn)一步研究其在心血管系統(tǒng)中的作用有著重要

2、的意義。
　　目的:研究心肌缺血后β3腎上腺素能受體在心臟中表達(dá)、分布改變的情況。
　　方法:(1)模型建立和取材:開(kāi)胸分離心包膜,在肺動(dòng)脈圓錐與左心耳之間結(jié)扎血管,建立大鼠心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?。術(shù)后8周取材,分離左心室,沿心臟短軸將左室橫切為兩半,一半用來(lái)切取厚片(包括有缺血區(qū)和非缺血區(qū)),整塊厚片固定后石蠟包埋,另一半冷藏備用。
　　(2)超聲心動(dòng)圖和血流動(dòng)力學(xué)方法檢測(cè)手術(shù)后大鼠的心功能:氯胺酮麻醉,應(yīng)用二維超聲,檢測(cè)

3、大鼠心臟的LVPW,IVS,LVIDd,LVIDs,左室長(zhǎng)軸,左室短軸,短軸縮短率、射血分?jǐn)?shù)等指標(biāo);通過(guò)BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)監(jiān)測(cè)HR、SP、DP、AP、LVDP、LVSP、LVAP、LVEDP、+dp/dt max、-dp/dt max等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。
　　(3)β3腎上腺素能受體的檢測(cè):HE染色觀測(cè)心肌缺血后心臟組織的鏡下表現(xiàn),應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)β3腎上腺素能受體在慢性缺血后心臟中的表達(dá)、含量及其分布的情況,運(yùn)

4、用western blot方法檢測(cè)慢性心肌缺血后心臟β3腎上腺素能受體蛋白表達(dá)的改變。
　　結(jié)果:(1)利用大鼠構(gòu)建慢性心肌缺血?jiǎng)游锬Ｐ?心肌組織大體標(biāo)本肉眼觀察可見(jiàn)到明顯的瘢痕形成;石蠟切片,蘇木素-伊紅染色后鏡下可以看到典型的變性、纖維化等缺血后的改變。
　　(2)超聲結(jié)果提示只有左室長(zhǎng)軸/短軸的比例值在兩組間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果提示,左心室舒張壓、左心室終末舒張壓升高,兩組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5、左心室內(nèi)壓最大上升速率、左心室內(nèi)壓最大下降速率降低,兩組比較差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　(3)免疫組化檢測(cè)后我們看到心肌細(xì)胞膜和細(xì)胞漿中均有β3腎上腺素能受體蛋白表達(dá),尤其是那些免于壞死纖維化的心肌細(xì)胞上表達(dá)更強(qiáng),代償肥大的心肌細(xì)胞中也有β3受體表達(dá)。心肌組織中小血管內(nèi)皮上也有β3腎上腺素能受體蛋白表達(dá)。Western blot結(jié)果顯示β3腎上腺素能受體在缺血后大鼠心肌組織中表達(dá)明顯上調(diào)。
　　結(jié)論:(1)β3受體在長(zhǎng)時(shí)間慢