中藥有效成分鬼臼毒素提制分析及其質量控制新方法研究.pdf

1、中藥是中華民族的瑰寶,至今已有五千多年的歷史,它在人們的治病防病、滋補保健等方面發(fā)揮著重要作用。但中藥有效成分的提制分析和質量控制一直是其發(fā)展中的瓶頸。因此,建立簡便、快速、準確度和靈敏度高的中藥活性成分提制分析和質量監(jiān)控新方法對其藥理研究、臨床應用和國際化發(fā)展有著重要意義。
　　 八角蓮、桃兒七和山荷葉是傳統(tǒng)鬼臼類中藥,具有清熱解毒、消炎鎮(zhèn)痛、化痰散結、祛瘀消腫之功效。其根中含有的鬼臼毒素不僅是治療尖銳濕疣的良好藥物,亦是合成

2、多種癌癥藥物的前體物質,在醫(yī)藥領域具有重要的應用價值。本文以中藥活性成分鬼臼毒素為研究對象,以現(xiàn)代新興樣品預處理技術為工具,從鬼臼藥材中對其進行提取,并對鬼臼毒素的選擇性分離提取方法進行了相關研究,同時建立了八角蓮藥材二維指紋圖譜質量控制標準,以期為中藥樣品前處理及其質量控制提供參考。具體內(nèi)容如下:
　　 1.中藥活性成分鬼臼毒素的提制分析
　　 研究建立了一種膠束介導提取技術,即離子液體(ILs)—微波輔助提取法(MA

3、E),對八角蓮、桃兒七和山荷葉中的活性成分鬼臼毒素進行提取。通過單因素實驗和正交試驗優(yōu)化提取工藝參數(shù),三種藥材中鬼臼毒素提取率最高值分別為96.8％,89.1％和82.4％。將所擬提取方法與ILs-超聲輔助提取、ILs-室溫冷浸提取和ILs-加熱提取法進行比較,發(fā)現(xiàn)ILs-MAE的提取時間最短,提取得率最高。采用反相高效液相色譜法測定鬼臼毒素含量,分析準確、快速。鬼臼毒素線性范圍在0.005-0.4 mg/mL(r=0.9993～0.9

4、996),檢測限為2.05～2.58μg/mL,樣品的平均回收率在97.1～102％之間,RSDs均低于3.0％。方法學考察結果表明儀器精密度和方法重現(xiàn)性良好。采用動力學曲線、電鏡掃描及紅外光譜技術對中藥提取前后殘渣的表面微觀結構和成分進行研究,初步探討ILs-MAE的提取機理。最后將所擬方法用于實際鬼臼生藥材分析,因產(chǎn)地不同,藥材中鬼臼毒素的含量差異顯著。
　　 2.分子印跡固相萃取法選擇性提取分離復雜中藥中活性成分鬼臼毒素<

5、br>　　 將微波加熱沉淀聚合法用于合成鬼臼毒素分子印跡聚合物,系統(tǒng)優(yōu)化了各合成工藝參數(shù)。結果表明,以丙烯酰胺為功能單體,乙二醇二甲基丙烯酸酯和二乙烯基苯為共交聯(lián)劑,乙腈為致孔劑,按模板分子、功能單體和交聯(lián)劑的摩爾比為1∶6∶40,在偶氮二異丁腈濃度為0.01 mol/L,聚合溫度為60℃的條件下微波加熱聚合150 min所制備的印跡聚合物識別性能最好。采用光譜分析、平衡吸附實驗、競爭性吸附實驗以及Scatchard分析等多種分析手段

6、,結合紅外、電鏡掃描和熱分析等表征方法以及高效液相色譜的檢測技術,對聚合物的識別機理、形貌和吸附性能進行了研究。將分子印跡聚合物作為固相萃取柱的吸附劑,用于實際樣品中鬼臼毒素分離富集。研究表明:該分子印跡固相萃取柱對鬼臼毒素兩種結構類似物的選擇性識別因子分別為16.93和5.60。八角蓮、桃兒七和山荷葉中鬼臼毒素的檢測限分別達到0.15,0.12和0.18μg/mL,回收率分別為91.1％,89.5％,90.6％(n=3),結果滿意。為

7、從中藥中高效分離富集鬼臼毒素提供了一種新途徑。
　　 3.中藥八角蓮二維指紋圖譜的創(chuàng)建
　　 建立了包含色譜和光譜信息的八角蓮二維指紋圖譜。與固定波長檢測的一維指紋圖譜相比,二維指紋圖譜數(shù)據(jù)信息量更大,更能全面客觀地控制藥材質量。利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》對10批次藥材色譜圖與共有模式指紋圖譜進行評價,相似度結果將不同來源的藥材樣品分為三組,分別為0.9674-0.9814,0.8725-0.8878和0.5