缺氧誘導(dǎo)肝纖維化動(dòng)物模型的建立.pdf

1、原發(fā)性肝癌(Primary liver carcinoma,PLC)是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)惡性腫瘤之一,全球每年新增約60萬(wàn)肝癌患者,我國(guó)肝癌年發(fā)病人數(shù)約35萬(wàn),有30萬(wàn)人死于此病,發(fā)病率和死亡率均占惡性腫瘤第二位。目前,肝切除術(shù)、肝移植等根治性外科治療仍是肝癌首選治療方法。但是肝癌發(fā)病隱匿,早期患者可能沒(méi)有任何癥狀,將近70％的患者就診時(shí)已屬中晚期,失去了手術(shù)的機(jī)會(huì)。經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈化療栓塞術(shù)(Transcatheter arterial

2、 chemoembolization, TACE)被公認(rèn)為是不能手術(shù)切除肝癌的首選治療方法,該治療能夠阻斷肝癌供血的靶動(dòng)脈,導(dǎo)致肝癌組織缺血壞死?；颊咧委熀笈R床病情明顯改善,腫瘤體積縮小,癥狀緩解或消失。介入栓塞治療降低了肝癌組織的血管侵襲及轉(zhuǎn)移的幾率,部分病人可重新獲得手術(shù)切除機(jī)會(huì)。但是,臨床觀察發(fā)現(xiàn),介入栓塞治療或多或少都會(huì)影響患者的肝臟功能,特別是反復(fù)介入栓塞后,大部分伴有肝硬化的肝癌患者出現(xiàn)肝纖維化程度進(jìn)行性加重,肝功能持續(xù)下降

3、,嚴(yán)重影響了肝癌介入栓塞治療的遠(yuǎn)期療效及患者生存期。以往研究認(rèn)為,肝纖維化是各種原因引起的慢性肝損傷所共有的病理改變,介入栓塞治療后化療藥物、炎癥、組織缺血、缺氧以及治療后可能出現(xiàn)的機(jī)體免疫機(jī)能變化、細(xì)胞因子調(diào)控失常,均可從不同的環(huán)節(jié)啟動(dòng)肝纖維化過(guò)程,并最終加重肝纖維化。栓塞所致的組織缺氧是導(dǎo)致肝癌組織壞死的主要原因,也可能是加重肝纖維化重要的因素之一。因此,本研究擬建立一種肝臟組織缺氧導(dǎo)致的肝纖維化動(dòng)物模型,用于介入治療后缺氧導(dǎo)致肝纖

4、維化機(jī)制的研究,并且研究這一過(guò)程中可能的關(guān)鍵分子,為介入栓塞后肝纖維化的治療提供理論依據(jù)。本研究分兩個(gè)部分:
　　第一部分肝固有動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)建立大鼠肝臟缺氧模型
　　目的:利用肝動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)(Hepatic arterial ligation,HAL)的手術(shù)方法,建立大鼠肝臟缺氧模型。
　　方法:健康成年Sprague Dawley(SD)大鼠8只,隨機(jī)抽取3只進(jìn)行解剖,了解實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟位置、大小、分葉情況,確定腹腔血管走

5、行及分支情況,掌握肝門(mén)部管道的位置關(guān)系及解剖分離技術(shù)。另外5只大鼠麻醉后行開(kāi)腹手術(shù),分離暴露肝門(mén)部,結(jié)扎其肝固有動(dòng)脈造成肝臟缺氧,縫合腹壁。觀察手術(shù)后大鼠基本生命體征變化和存活情況。
　　結(jié)果:通過(guò)對(duì)3只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的解剖觀察,熟悉了大鼠肝臟及腹腔血管的解剖位置。對(duì)5只大鼠進(jìn)行肝固有動(dòng)脈結(jié)扎術(shù),1只動(dòng)物由于術(shù)中誤傷肝門(mén)靜脈導(dǎo)致大出血死亡,其余動(dòng)物手術(shù)順利,術(shù)后全部存活,生命體征平穩(wěn)。
　　結(jié)論:大鼠肝固有動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)手術(shù)成功率高,

6、適合用于建立肝臟缺氧的動(dòng)物模型。
　　第二部分肝臟缺氧誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化
　　目的:利用肝臟缺氧模型,觀察手術(shù)后大鼠肝臟病理改變,初步分析缺氧誘導(dǎo)肝纖維化形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用的分子。
　　方法:10只SD大鼠,隨機(jī)分為缺氧組和對(duì)照組,每組5只,缺氧組行肝固有動(dòng)脈結(jié)扎術(shù),對(duì)照組手術(shù)開(kāi)腹分離至肝門(mén)部后即縫合腹壁。14天后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取出肝臟,福爾馬林固定后石蠟包埋切片,行蘇木精-伊紅(Hematoxylin– Eosin,

7、HE)染色觀察組織病理改變,并進(jìn)行天狼星紅-苦味酸染色觀察膠原增生情況。免疫組織化學(xué)染色(Immunohistochemistry,IHC)觀察缺氧誘導(dǎo)因子1α(Hypoxia inducible factor1α,Hif-1α)表達(dá)。
　　結(jié)果:缺氧組大鼠肝細(xì)胞壞死、增生,膠原纖維生成,Hif-1α表達(dá)顯著升高,與對(duì)照組比較具有顯著差異。
　　結(jié)論:肝固有動(dòng)脈結(jié)扎缺氧能夠誘導(dǎo)大鼠肝臟纖維化形成,Hif-α在肝纖維化組織中表