mTORC1參與調節(jié)胰島β細胞增殖及其機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景與目的:胰島β細胞量受胰島β細胞大小、增殖、新生和凋亡動態(tài)調節(jié),其在維持機體葡萄糖穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著重要作用,當機體的糖代謝需求增加時,胰島β細胞量也相應的增加。當機體胰島β細胞量擴增無法滿足機體糖代謝需求時,糖代謝就出現(xiàn)異常。成年后胰島β細胞的增加主要通過增殖途徑,因此胰島β細胞的增殖機制研究成為今年的一個研究熱點。胰島素、葡萄糖和生長因子是促進胰島β細胞增殖的重要營養(yǎng)素,而mTORC1信號作為細胞的能量感受器在胰島β細胞的增殖中發(fā)

2、揮著重要作用。雖然有不少文獻報道,但mTORC1信號在胰島β細胞增殖中的確切作用和機制仍然不是十分清楚。因此我們利用胰腺60%切除誘導胰島β細胞代償性增殖的模型和轉基因小鼠探討 mTORC1信號在胰島β細胞增殖中的作用和機制。
  材料和方法:1)構建胰腺60%切除誘導胰島β細胞增殖的模型。2)利用胰腺60%切除誘導胰島β細胞增殖的模型和mTORC1抑制劑雷帕酶素(rapamycin)干預實驗探討mTORC1信號在胰島β細胞增殖中

3、的作用。8周齡雄性C57BL/6J小鼠,隨機分成四組:第一組小鼠施行假手術后每天腹腔注射生理鹽水,標記為Sham+vehicle;第二組小鼠施行假手術后每天給予0.5mg/kg.d的rapamycin,標記為 Sham+rapa;第三組小鼠60%胰腺切除后每天腹腔注射生理鹽水,標記為Px+vehicle;第四組小鼠60%胰腺切除后每天腹腔注射0.5mg/kg.d的rapamycin,標記為Px+rapa。術前及術后7天測量各組小鼠的體重

4、,術后第6天進行腹腔葡萄糖耐量實驗(IPGTT)、胰島素釋放實驗(IRT)和胰島素耐量試驗(ITT)。術后第7天斷頸處死小鼠,一部分小鼠分離胰島抽提RNA,另一部分小鼠胰腺取材,4%多聚甲醛固定后石蠟包埋切片后染色觀察增殖指標ki67的變化。3)觀察胰島β細胞特異性敲除raptor小鼠(βRapKO)體重、血糖、糖耐量的變化。4)觀察β細胞特異性敲除Rictor小鼠(βRicKO),在60%胰腺切除下,糖耐量和胰島β細胞增殖的變化5)利

5、用rapamycin干預胰島Rinm5f細胞,觀察rapamycin抑制mTORC1信號后胰島Rinm5f細胞的增殖情況。6)利用慢病毒下調胰島Rinm5f細胞的rapator蛋白表達后,觀察Rinm5f細胞的增殖情況,并利用westernblot檢測mTORC1下游信號通路的改變。
  結果:1)胰腺60%切除小鼠,rapamycin處理6天后,胰島素分泌和胰島內胰島素含量出現(xiàn)顯著下降,葡萄糖耐量受損;然而,外周胰島素抵抗沒有變

6、化。2) rapamycin顯著抑制胰腺60%切除小鼠的胰島β細胞代償性增殖。3)βRapKO小鼠隨機血糖和空腹血糖均明顯升高,葡萄糖糖耐量異常。4)與60%胰腺切除Riclox/lox小鼠相比較,βRicKO小鼠胰腺60%切除后,葡萄糖糖耐量和胰島β細胞增殖率均無明顯變化。5)Rapamycin顯著抑制胰島β細胞Rinm5f的增殖。6)沉默Raptor下調cyclinD2的表達的同時抑制胰島β細胞Rinm5f的增殖。
  結論:

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