硒通過內質網(wǎng)通路拮抗鎘誘導的雞中性粒細胞凋亡的研究.pdf

1、鎘(cadmium，Cd)是一種可以降低免疫功能和誘導免疫細胞凋亡的一種物質。硒(selenium，Se)是一種重要的微量元素，在保護免疫細胞和免疫功能方面具有一定的作用。硒可以拮抗包括鎘的一些有毒金屬元素。中性粒細胞是存在于生物體內一種豐富的炎癥細胞，它代表先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，也參與炎癥性疾病。本研究采用雞外周血中性粒細胞為試驗對象，使其分別作用于氯化鎘(10-6 mol/L)，亞硒酸鈉(10-7 mol/L)，和混合物（10

2、-7 mol/L的亞硒酸鈉和10-6 mol/L氯化鎘）并體外孵育12，24，36，和48小時。通過雞外周血中性粒細胞形態(tài)變化、免疫因子和炎癥因子基因水平和蛋白水平的變化，進而研究鎘的毒性和硒對雞的外周血中性粒細胞細胞在體外細胞毒性的保護作用，最終明確了內質網(wǎng)通路下硒拮抗鎘至雞外周血中性粒細胞的凋亡機制。通過研究得出以下結論:
　　1.通過熒光定量PCR技術檢測雞外周血中性粒細胞炎癥的相關基因，結果發(fā)現(xiàn)鎘能夠影響相關基因的表達。I

3、L-1β，IL-10，IL-4和IFN-γ表達量明顯增加，IL-17明顯降低。加鎘組NF-κB，iNOS，COX-2，TNF-α及PGE2的mRNA表達水平明顯增加(P＜0.05)。硒能調節(jié)相關基因的表達，降低了炎癥基因的表達。
　　2.通過熒光定量PCR技術檢測雞外周血中性粒細胞凋亡的內質網(wǎng)通路的相關基因，結果發(fā)現(xiàn)，加鎘組Bak，Caspase-3，Caspase-9，Caspase-12，GRP78和ATF6的mRNA水平明顯

4、增加，Bcl-xL和CaM顯著降低。鎘引起雞外周血中性粒細胞凋亡相關基因的表達在硒的作用下發(fā)生改變，硒減緩了中性粒細胞的凋亡。
　　3.通過Western blotting蛋白檢測相關炎癥和凋亡基因蛋白的表達，發(fā)現(xiàn)鎘組NF-κB和Caspase-12的蛋白表達也顯著增加。硒拮抗了鎘引起的這一作用。
　　4.通過熒光染色(AO/EB)和流式細胞術分別檢測了雞外周血中性粒細胞的加鎘組，加硒組，硒加鎘組處理后的情況，從生物學和形態(tài)