咖啡酸鍺抗腫瘤活性與機制研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴重危害人類健康，宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的50％以上，病死率居婦女惡性腫瘤的首位。調查發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率呈每年上升及年輕化趨勢。藥物治療是目前臨床治療惡性腫瘤的主要手段之一．尋找和研發(fā)高效低毒的化療藥物，是當代化學和醫(yī)學領域的重要研究課題。有機鍺化合物是具有抗癌活性的金屬化合物之一，因其廣譜的抗癌作用，獨特的生理活性，極低的毒性而日益受到人們的重視。目的： 研究咖啡酸鍺對荷瘤小鼠的實驗治療作用及

2、體外抗腫瘤活性，從細胞、亞細胞水平探討其抗腫瘤作用機制，并考察咖啡酸鍺的急性毒性，為咖啡酸鍺作為新型化療藥物的開發(fā)和應用提供實驗依據(jù)。方法： 建立小鼠皮下移植瘤模型，觀察咖啡酸鍺對小鼠U14宮頸癌和小鼠H22肝癌的實驗治療作用;以HE染色、MG-P染色和透射電鏡的方法觀察咖啡酸鍺誘導小鼠移植瘤細胞凋亡的作用；應用流式細胞術檢測咖啡酸鍺作用后腫瘤組織的細胞凋亡率和分析細胞周期改變；采用免疫組化方法，觀察藥物作用后小鼠移植瘤組織中b

3、ax和bcl．2蛋白表達情況；采用MTT法評價咖啡酸鍺體外抑制u14和H22腫瘤細胞活性；觀察咖啡酸鍺對小鼠的急性毒性。 結果： l、對荷瘤小鼠的抗腫瘤實驗結果提示，咖啡酸鍺對宮頸癌u14有很好的實驗治療作用：連續(xù)給藥10天后，0.5m/kg、1 mg/kg和2mg，kg劑量組的抑瘤率分別為38.5％、47.2％和64.0％，瘤重與陰性對照組比較均有顯著性差異(P<0.01)。咖啡酸鍺對肝癌H22亦有顯著的體內(nèi)抗腫瘤作用

4、，0.5 mg/k、1 mg/kg和2 mg/kg劑量組的抑瘤率分別為37.4％、47.2％和64.0％，瘤重均明顯小于陰性對照組(P<0.01)。MTT法實驗結果表明：咖啡酸鍺對體外培養(yǎng)的U14細胞和H22細胞增殖均有一定程度的抑制作用，對48小時后的U14細胞的ICso值為48.57μg/ml2、咖啡酸鍺對U14荷瘤小鼠、H22荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響，與陰性對照組比較，均無明顯差異(P>0.05)，體重無明顯下降(P>0.

5、05)。相對于化療藥物環(huán)磷酰胺對機體出現(xiàn)的嚴重免疫抑制作用，咖啡酸鍺體現(xiàn)出一定優(yōu)勢。 3、HE染色、MG-P染色組織病理學及電鏡觀察可見，咖啡酸鍺組出現(xiàn)較多的凋亡細胞(P<0.05)，可見細胞皺縮變小，胞漿致密，核固縮，染色質濃集、邊聚、胞質空泡化等細胞凋亡的形態(tài)學特征。 4、流式細胞術檢測結果表明，咖啡酸鍺能誘導U14腫瘤細胞凋亡，在GO～GI前出現(xiàn)一個明顯的凋亡峰，細胞周期被阻滯在s期。 5、免疫組化實驗結果表明，咖

6、啡酸鍺誘導細胞凋亡是通過影響促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表達來實現(xiàn)的?？Х人徭N使U14和H22細胞bcl-2蛋白表達下調，bax蛋白表達上調。 6、急性毒性實驗表明，咖啡酸鍺對小鼠無明顯急性毒性，最大耐受量為8g/kg。 結論： 咖啡酸鍺在體內(nèi)外均能有效抑制小鼠U14宮頸癌、小鼠H22肝癌的生長，且無免疫抑制作用，無明顯急性毒性。咖啡酸鍺可明顯上調U14和H22細胞中bax蛋白的表達，下調bcl-2蛋白的表達，進而促