恒河猴骨髓間充質(zhì)干細胞的定向分化及其機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、肌腱損傷是外科臨床的常見疾病,目前尚未有理想的治療方法.肌腱組織工程研究為臨床修復肌腱損傷和缺損提供了新思路.該研究通過貼壁篩選法結(jié)合MSCs專用培養(yǎng)基MSCGM從非人靈長類動物恒河猴骨髓中分離、培養(yǎng)骨髓MSCs,建立體外培養(yǎng)擴增骨髓MSCs的方法;應用免疫組織化學和流式細胞術等手段檢測所分離細胞的堿性磷酸酶活性、細胞表面抗原標志、細胞基質(zhì)蛋白屬性;采用排除法對所離的細胞進行鑒定,并將所分離細胞接種于裸鼠體內(nèi)觀察其多向分化潛能;應用原位

2、雜交法檢測MSCs的端粒酶活性;通過基因轉(zhuǎn)染方法將外源基因BMP12導入骨髓MSCs中,誘導骨髓MSCs定向分化為腱細胞;通過Western Blotting檢測BMP12基因?qū)牒蟮腗SCs內(nèi)信號蛋白分子Smad4的表達變化,初步探討骨髓MSCs定向分化為腱細胞的機制.結(jié)果表明,該研究成功地建立了體外培養(yǎng)擴增骨髓MSCs的簡單、穩(wěn)定、高效的方法.MSCs的細胞周期和生長曲線提示所分離的MSCs具有較強的增殖潛能;免疫組織化學和流式細胞

3、術檢測證實了所分離的細胞為未分化的骨髓MSCs,而且細胞的均一性較好,純度較高;原位雜交法證實了MSCs具有較高的端粒酶活性;裸鼠體內(nèi)實驗表明所分離的MSCs具有多向分化的能力;通過基因轉(zhuǎn)染的方法將外源基因BMP12導入骨髓MSCs中,成功地誘導了骨髓MSCs定向分化為腱細胞;通過形態(tài)學觀察、RT-PCR和流式細胞術檢測顯示,誘導后的細胞表型發(fā)生明顯改變,具有與腱細胞相似的表型特征,而且誘導后的細胞仍保持較強的增殖能力;Western

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