煙酰胺治療兔椎間盤退變的實驗研究.pdf

1、一.煙酰胺對體外培養(yǎng)兔椎間盤基質的保護作用 目的:觀察煙酰胺對椎間盤蛋白聚糖及Ⅱ型膠原的保護作用，并探討其機制。 方法:構建兔椎間盤組織凝膠培養(yǎng)模型，以白介素-1β(IL-1β)誘發(fā)其退變。將其分為1～6組：第1組為正常對照，2～6組分別加入0.5mg/mlNia；10ng/mlIL-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia，10ng/mlIL-1β及0.25mgNia；10ng/mlIL-1β及0.05mgNi

2、a。培養(yǎng)至1周及2周時對各組標本藏紅O-快綠染色，葡萄糖醛酸含量測定，以及aggrecan核心蛋白，培養(yǎng)至2周時行椎間盤Ⅱ型膠原RT-PCR及免疫組化檢測，培養(yǎng)1周時行iNOS及TGF-β1免疫組化檢測。 結論：體外條件下，煙酰胺可提高椎間盤聚集蛋白聚糖及Ⅱ型膠原含量，對抗IL-1β誘發(fā)的蛋白聚糖和Ⅱ型膠原含量下降。這種保護作用與其抑制iNOS的表達和保護TGF-β1的表達有關。煙酰胺具備用于椎間盤退變臨床治療的潛力。

3、二.煙酰胺對體外培養(yǎng)兔椎間盤組織凋亡及能量代謝相關基因的影響 目的:觀察煙酰胺(Nia)對白介素-1β(IL-1β)誘導的體外培養(yǎng)的椎間盤組織內細胞凋亡的抑制作用及能量代謝相關基因：HIF-1α(缺氧誘導因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖轉運蛋白-1)和VEGF(血管內皮生長因子)表達的影響。 方法:構建兔椎間盤組織凝膠培養(yǎng)模型，將其分為1～4組：第1組為正常對照，2～4組分別加入0.5mg/mlNia；10ng/mlI

4、L-1β；10ng/mlIL-1β及0.5mgNia。培養(yǎng)一周后對各組標本行TUNEL、FAS、Caspase-3、Bcl-2、HIF-1α，GLUT-1及VEGF免疫組化染色。 結論:煙酰胺可以抑制IL-1β誘導的椎間盤細胞凋亡。煙酰胺對椎問盤組織的能量代謝有促進作用，可以改善IL-1β導致的能量代謝障礙。 三.煙酰胺對兔髓核細胞增殖及凋亡的調節(jié)作用 目的:考察煙酰胺(Nia)對髓核細胞增殖及凋亡的調控作用及其

5、機制。 方法:體外培養(yǎng)兔髓核細胞，將其分為1～6組：第1組為正常對照組，不加入藥物。2～6組分別加入0.5mg/ml煙酰胺，10ng/mlIL-1β，10ng/mlIL-1β及非特異性Caspase抑制劑Z-VAD-FMK，10ng/mlIL-1β及0.05mg/ml煙酰胺，10ng/mlIL-1β及0.5mg/ml煙酰胺。藥物處理3天后對各組細胞行AnnexinV-PI染色、Caspase-3、Caspase-8、Caspas

6、e-9功能的流式細胞儀檢測，熒光顯微鏡照相及MTT法檢測。 結論:煙酰胺可以促進髓核細胞的增殖和抑制IL-1β誘導的髓核細胞凋亡，對于凋亡的抑制作用主要通過抑制Caspase-9相關的線粒體凋亡途徑實現(xiàn)的。 四.可控壓力致兔腰椎間盤退變模型的構建及其對纖維環(huán)能量代謝相關基因的影響 目的:構建“可控壓力致兔腰椎問盤退變模型”，并考查該模型能量代謝相關基因：HIF-1α(缺氧誘導因子-1α)、GLUT-1(葡萄糖轉運

7、蛋白-1)和VEGF(血管內皮生長因子)的表達情況并探討其意義。 方法:采用可控壓力致兔腰椎問盤退變模型構建輕度兔椎問盤退變模型，Thompson分級及HE化染色觀察退變程度。以10kg軸向壓力獲得加壓24h組、72h組、加壓24h后恢復48h組(恢復組)及正常對照組兔椎間盤標本，分離其纖維環(huán)組織，RT-PCR檢測HIF-1α、GLUT-1基因的表達，WesternBlot及免疫組化檢測VEGF的含量及分布。 結論:可控

8、壓力致椎間盤退變模型可以有效地誘發(fā)壓力導致的椎間盤退變。能量代謝相關基因表達的變化在壓力致椎間盤組織損傷及損傷后修復的過程中扮演者重要角色。因此，將具有細胞能量代謝促進作用的煙酰胺應用于椎間盤退變的治療和預防具有可靠的理論基礎。 五.煙酰胺治療可控壓力致兔腰椎間盤退變模型的實驗研究 目的:考查煙酰胺對壓力導致的兔椎問盤退變的治療作用。 方法:構建可控壓力致兔椎間盤退變模型。將24只日本大白兔隨機分入1～6組：第1

9、組2只，為假手術對照組；第2組2只，給與約50mg/kg煙酰胺口服1周；第3組5只，以10kg壓力加壓1周；第4組5只，以10kg壓力加壓1周，白行恢復1周，第5組5只，加壓1周，給予約50mg/kg煙酰胺口服1周，第6組5只，給與約50mg/kg煙酰胺口服2周，這期間先加壓1周，然后恢復1周。對各組標本進行形態(tài)學觀察、HE染色、藏紅O-快綠染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色。 結論:煙酰胺有助于減輕壓力對椎問盤的損傷，能夠促進壓力損傷