腸癌中RSPO2表達沉默的分子機制.pdf

1、目的：
　　R-spondin2(RSPO2)作為Wnt信號通路的調節(jié)因子，被認為在腸癌的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要作用。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)RSPO2腸癌組織和細胞中表達明顯下調，在大部分腸癌中RSPO2發(fā)揮抑癌基因的功能，并且存在一種R-spondin2介導的LGR5依賴的Wnt信號通路負反饋調節(jié)機制。本課題將對腸癌中RSPO2表達沉默的分子機制進行研究。
　　方法：
　　1)通過反轉錄-實時熒光定量PCR檢測腸癌組織中

2、RSPO2的mRNA表達水平。
　　2)通過生物信息學軟件Methyl Primer Express vl.0 software分析RSPO2基因啟動子區(qū)域的CpG島。
　　3)通過甲基化測序PCR(BSP)和甲基化特異性PCR(MSP)檢測腸癌細胞和組織中RSPO2基因CpG島的甲基化。
　　4)通過Sanger基因測序檢測腸癌組織RSPO2啟動區(qū)基因突變情況。
　　5)通過TaqMan拷貝數(shù)變異分析實驗檢測腸

3、癌組織基因組RSPO2基因的拷貝數(shù)變化(CNV)。
　　結果：
　　1)腸癌組織RSPO2mRNA表達水平與癌旁組織相比確實出現(xiàn)顯著下調。
　　2) MSP結果顯示9種腸癌細胞系中RSPO2基因均發(fā)生了甲基化修飾，對照細胞HEK293則無;76％的腸癌樣本的腫瘤組織發(fā)生了甲基化修飾，癌旁組織中則少很多;BSP結果顯示腸癌細胞和腸癌組織RSPO2啟動子區(qū)CpG位點基本全部發(fā)生甲基化，而對照HEK293細胞和癌旁組織基本沒