沙眼衣原體感染后HeLa-229細胞的miRNA差異表達及其功能研究.pdf

1、[目的]miRNA是近些年來新發(fā)現的一類能夠調控其靶基因表達水平的小分子RNA家族。目前，miRNA的功能研究主要集中于生長發(fā)育、腫瘤發(fā)生、細胞增殖、細胞凋亡等方面，隨著研究的不斷深入，發(fā)現miRNA參與了病毒和細菌這些病原微生物與宿主細胞的相互作用過程。本研究的初衷在于進一步探索miRNA在微生物感染宿主細胞過程中所發(fā)揮的作用及其調控機制，拓展我們關于miRNA功能的認識。
　　[方法]首先在本實驗室建立沙眼衣原體的體外培養(yǎng)模型

2、，使用HeLa-229作為宿主細胞培養(yǎng)擴增沙眼衣原體。并通過方法的改進提高了衣原體感染宿主細胞的效率，使絕大多數細胞都被沙眼衣原體感染，為之后的miRNA表達譜芯片實驗提供更好的基礎，而后使用miRNA表達譜芯片檢測沙眼衣原體感染宿主細胞后，細胞中各個miRNA的表達水平的變化。從中篩選表達水平變化最為顯著的一些，并結合已有的關于這些miRNA的研究進展進行綜合分析，選取一些最有可能與衣原體感染相關的miRNA作為后續(xù)研究的候選者。最后

3、針對這些候選的miRNA，根據其參與的生長調控，凋亡等不同機制，在衣原體感染這個模型的基礎上，通過ASO技術封閉其功能;而后選擇適當的實驗對一些細胞生物學指標，如細胞生長曲線、Hoechst法凋亡檢測等指標進行檢測，以此來評估這些miRNA在衣原體感染過程中所發(fā)揮的作用。
　　[結果]1.成功建立了E血清型沙眼衣原體的體外細胞感染模型，并成功的提高了其感染效率。
　　2.通過miRNA表達譜芯片這種高通量的篩選方法篩選得到了

4、14個表達水平明顯變化的miRNA。其中9個在感染衣原體的細胞中表達水平明顯上調，5個表達水平明顯下調。
　　3.根據miRNA表達譜芯片的結果提示，發(fā)現通過人為的封閉表達水平上升的9個miRNA的功能，使得沙眼衣原體在感染這種細胞后最終復制產生的子代衣原體明顯減少;通過生長曲線實驗證明has-miR-190、has-miR-372的低表達可以明顯的抑制HeLa-229細胞的分裂增殖。由此推斷沙眼衣原體感染后通過改變這兩個miRN

5、A的表達水平對宿主細胞的分裂增殖活性產生影響，最后通過Hoechst凋亡檢測證實了has-miR-15、has-miR-16同時參與了衣原體感染后所誘導的宿主細胞凋亡過程，并發(fā)揮著明顯的作用。
　　[結論]沙眼衣原體感染宿主細胞后對宿主細胞中多個miRNA的表達水平產生影響，而這些miRNA在衣原體感染和復制中發(fā)揮著明顯的作用，尤其是has-miR-190、has-miR-372、has-miR-15a、has-miR-16分別通