中藥復(fù)方有效物質(zhì)沉淀合大孔樹(shù)脂富集制備技術(shù)研究.pdf

1、本論文分為五個(gè)部分。第一部分文獻(xiàn)綜述從傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)研究在世界范圍內(nèi)的復(fù)蘇說(shuō)起，對(duì)中藥復(fù)方研究的現(xiàn)狀與新進(jìn)展從復(fù)方化學(xué)研究思路，復(fù)方配伍研究，以及研究技術(shù)手段三個(gè)方面進(jìn)行了綜述，并用研究實(shí)例進(jìn)行了說(shuō)明，對(duì)研究中的不足與問(wèn)題進(jìn)行了總結(jié)。 針對(duì)黃連解毒湯和葛根芩連湯，分別對(duì)其全方的化學(xué)成分研究、藥理研究進(jìn)行了綜述；并對(duì)其配伍化學(xué)、藥理研究進(jìn)行了整理和歸納；討論了二方的生產(chǎn)工藝及研究現(xiàn)狀，并引出本論文研究試圖解決的問(wèn)題。 第二部分復(fù)

2、方有效物質(zhì)沉淀合大孔樹(shù)脂富集制備技術(shù)研究第一章黃連解毒湯有效部位沉淀合大孔樹(shù)脂富集制備技術(shù)研究對(duì)黃連解毒湯有效部位制備工藝進(jìn)行研究，得出最佳提取工藝為：B％乙醇回流提取N3次，每次加醇B1倍體積量，回流提取Tlmin。其沉淀制備工藝研究結(jié)論為：將提取液濃縮至原體積的A1倍后，在原液狀態(tài)下加入A鹽，使溶液中的鹽濃度達(dá)到Clmol/l，再在室溫下放置過(guò)夜，過(guò)濾，得沉淀。最后，對(duì)所得濾液的大孔樹(shù)脂富集工藝進(jìn)行研究，結(jié)論為：使用C型大孔吸附樹(shù)脂

3、，用原濾液，以L2ml/min的流速上樣，樹(shù)脂徑高比為1：H2，按照上樣液體積與樹(shù)脂體積比為V3：1進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，水洗脫xBV，洗脫劑采用B％乙醇，洗脫量為約yBV，洗脫流速為L(zhǎng)2ml/min。 三批樣品的制備和含量測(cè)定結(jié)果表明，提取物得率平均為23.48％，總黃酮含量平均為21.06％，總生物堿含量平均為11.22％，總環(huán)烯醚萜含量平均為13.30％，梔子苷含量平均為5.92％；總黃酮提取率平均為96.43％，總生物堿提取率平

4、均為83.16％，總環(huán)烯醚萜提取率平均為98.94％。 沉淀物得率平均為7.38％，總黃酮含量平均為33.85％，總生物堿含量平均為22.91％，總環(huán)烯醚萜含量平均為0.99％；總黃酮轉(zhuǎn)移率平均為49.02％，總生物堿轉(zhuǎn)移率平均為51.25％，總環(huán)烯醚萜轉(zhuǎn)移率平均為2.33％。 濾液大孔樹(shù)脂富集物得率平均為6.04％，總黃酮含量平均為28.21％，總生物堿含量平均為11.91％，總環(huán)烯醚萜的含量平均為31.15％；總黃酮

5、轉(zhuǎn)移率平均為33.33％，總生物堿轉(zhuǎn)移率平均為21.81％，總環(huán)烯醚萜轉(zhuǎn)移率平均為60.64％。 總制備物得率平均為13.42％，總黃酮含量平均為31.30％，總生物堿含量平均為17.96％，總環(huán)烯醚萜的含量平均為14.55％；總黃酮轉(zhuǎn)移率為82.35％，總生物堿轉(zhuǎn)移率為73.06％，總環(huán)烯醚萜轉(zhuǎn)移率為62.97％。工藝穩(wěn)定性良好，簡(jiǎn)便可行。 第二章葛根芩連湯有效部位沉淀合大孔樹(shù)脂富集制備技術(shù)研究對(duì)葛根芩連湯有效部位制備

6、工藝進(jìn)行研究，得出最佳提取工藝為：全方，B％乙醇回流合提N2次，每次加醇B1倍體積量，回流提取T1min。還對(duì)其沉淀制備工藝進(jìn)行了研究，結(jié)論為：將提取液濃縮至原體積的A1倍后，在原液狀態(tài)下加入A鹽，使溶液中的鹽濃度達(dá)到C4mol/l，再在室溫下放置過(guò)夜，過(guò)濾，得沉淀。最后，對(duì)所得濾液的大孔樹(shù)脂富集工藝進(jìn)行研究，結(jié)論為：使用C型大孔吸附樹(shù)脂，用原濾液，以L2ml/min的流速上樣，樹(shù)脂徑高比為1：H2，按照上樣液體積與樹(shù)脂體積比為V7：1

7、進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，水洗脫xBV，洗脫劑采用B％乙醇，洗脫量為yBV，洗脫流速為L(zhǎng)2ml/min。 三批樣品的制備和含量測(cè)定結(jié)果表明，提取物得率平均為23.42％，總黃酮含量平均為23.20％，總生物堿含量平均為9.14％，葛根素含量平均為1.67％，甘草酸含量平均為1.11％；總黃酮提取率平均為96.36％，總生物堿提取率為91.14％，葛根素提取率為90.77％，甘草酸提取率為94.20％。 沉淀物得率平均為5.44％，總

8、黃酮含量平均為37.40％，總生物堿含量平均為19.38％；總黃酮轉(zhuǎn)移率平均為38.47％，總生物堿轉(zhuǎn)移率平均為47.73％。 大孔樹(shù)脂富集物得率平均為7.97％，總黃酮含量平均為30.95％，總生物堿含量平均為11.49％；總黃酮轉(zhuǎn)移率平均為43.64％，總生物堿轉(zhuǎn)移率平均為38.83％。 總制備物的得率平均為13.77％，總黃酮含量平均為33.67％，總生物堿含量平均為14.81％；總黃酮轉(zhuǎn)移率為82.13％，總生物

9、堿轉(zhuǎn)移率為86.56％。工藝穩(wěn)定性良好，簡(jiǎn)便可行。 第三部分質(zhì)量控制方法的建立第一章葛根芩連湯中甘草酸含量測(cè)定方法的建立葛根芩連湯中甘草酸含量測(cè)定方法，色譜條件：色譜柱YWG-C18(250mm×4.6mm，10μm)；流動(dòng)相：甲醇：0.2mol/l醋酸銨：冰醋酸(64.5：35.5：1)；流速：0.7mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm;柱溫：室溫。 第二章黃連解毒湯中總黃酮和總環(huán)烯醚萜含量測(cè)定方法的建立黃連解毒湯中總黃

10、酮的測(cè)定方法：樣品用70％乙醇溶解，精密量取適量樣品液至10.0mL刻度試管內(nèi)(內(nèi)有250mg鎂粉)，將刻度試管置于冷水中，定量加入鹽酸2.0mL(一次0.2mL，分十次加入，20min內(nèi)加完)。反應(yīng)完畢后，至于沸水浴中加熱1小時(shí)，取出，冷水沖涼，乙醇定容至10.0mL，搖勻。在424nm處測(cè)定吸光度。 黃連解毒湯中總環(huán)烯醚萜的測(cè)定方法：樣品用30％乙醇溶解，精密量取供試品溶液適量，加入相應(yīng)量的磷鉬酸試劑，使產(chǎn)生沉淀，過(guò)濾后，以

11、4ml經(jīng)過(guò)中性氧化鋁柱純化(柱內(nèi)徑0.9cm，內(nèi)裝氧化鋁4g)，用無(wú)水乙醇洗脫10ml。取適量洗脫液，蒸干。先加入5％的香草醛冰醋酸溶液0.2ml，再加入高氯酸0.8ml。搖勻后，放置10min，放入60℃水浴中，加熱15min，取出，冷水浴冷卻10min，再加入5ml冰醋酸，搖勻。在540nm處測(cè)定吸光度. 上述測(cè)定方法均有良好的精密度和重復(fù)性，回收率合格，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可信。 第四部分指紋圖譜比較研究對(duì)合提提取物，沉淀

12、工藝制備所得沉淀物，濾液大孔樹(shù)脂富集物；以及分提配比物，水分散沉淀物，濾液大孔樹(shù)脂富集物上述6個(gè)樣品進(jìn)行了HPLC指紋圖譜比較，分析各圖譜可以看出，二方合提物和分提配比物化學(xué)成分基本類(lèi)似，從各主要成分的量來(lái)看，合提經(jīng)沉淀工藝后黃芩苷、小檗堿等主要化學(xué)成分在沉淀中分布較多，比分提后水分散所得沉淀中的量明顯增加。相應(yīng)經(jīng)沉淀工藝后在濾液大孔樹(shù)脂富集的過(guò)程中則減輕了樹(shù)脂柱的負(fù)載。指紋圖譜比較研究的結(jié)果進(jìn)一步佐證了該工藝的合理性和可行性。