非諾貝特改善糖尿病小鼠血管內皮功能及其機制研究.pdf

1、研究目的:糖尿病(DM)是影響人類健康的全球性公共問題，預計到2030年全球糖尿病患者將增至4.39億。糖尿病微血管并發(fā)癥(Microvascularcomplications)和大血管并發(fā)癥(Macrovascular complications)是糖尿病患者傷殘和死亡的重要原因。高血糖導致的內皮功能障礙(Endothelial dysfunction)使血管舒張功能和收縮功能受損，破壞了血管的完整性。內皮功能障礙被認為是1型和2型糖

2、尿病的早期標志，可用于血管疾病的獨立預測。因此，改善血管內皮功能對于糖尿病并發(fā)癥的預防和治療具有重要意義。
　　非諾貝特（FF）是過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)的激動劑，臨床用于降血脂。2010年美國心臟病學學會公布的ACCORD(Action to Control Cardiovascular Risk in Diabetes)試驗表明，非諾貝特聯(lián)合辛伐他汀的治療能降低伴血脂異常的2型糖尿病患者的心血管并發(fā)癥風險。<

3、br>　　一氧化氮(NO)由內皮型一氧化氮合酶(eNOS)產生，參與調節(jié)血管功能，在炎癥和血管病變發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮關鍵作用。NO的生物利用度取決于其產生和降解失活之間的平衡。糖尿病高血糖導致的高氧化應激(OS)狀態(tài)使eNOS脫耦聯(lián)，超氧化陰離子(Superoxide onion，O2-)過度產生，導致NO生物利用度降低。另一方面，NO的生物利用度降低，使血小板聚集增強、血管內皮細胞對單核細胞粘附作用增加而導致內皮功能障礙。
　　

4、腺苷單磷酸鹽激活蛋白激酶(AMPK)是高靈敏度的細胞代謝傳感器，可控制下游目標蛋白eNOS的表達。已有實驗證實，激活AMPK可通過增加p-eNOS的表達改善血管功能障礙。本課題研究:非諾貝特是否能夠改善糖尿病小鼠內皮依賴性舒張功能;非諾貝特是否能夠改善高糖誘導的內皮功能障礙;通過測定AMPK和eNOS磷酸化水平探索非諾貝特改善內皮細胞功能障礙的可能機制。
　　研究方法:
　　1.動物實驗：雄性C57小鼠，4周齡，隨機分為三組

5、:對照組(Control)、糖尿病模型組貝特治療后能夠顯著改善糖尿病小鼠主動脈內皮依賴性舒張功能障礙。非諾貝特對糖尿病小鼠主動脈收縮功能無明顯影響;L-NAME消除非諾貝特對小鼠主動脈內皮依賴性舒張功能的改善作用;非諾貝特對糖尿病小鼠主動脈非內皮依賴性舒張功能無明顯影響。這些結果提示:非諾貝特能夠改善糖尿病小鼠主動脈內皮依賴性舒張功能。
　　1)非諾貝特降低糖尿病小鼠主動脈O2-水平：與對照組相比，糖尿病模型組小鼠主動脈中O2-水

6、平明顯上升，而非諾貝特治療組小鼠主動脈O2-水平顯著降低。
　　2)非諾貝特對糖尿病小鼠主動脈eNOS表達無明顯影響
　　3)蛋白檢測結果表明:eNOS和p-eNOS在對照組、糖尿病模型組，以及非諾貝特治療組的糖尿病小鼠主動脈中的表達并無顯著差異。
　　2.非諾貝特能夠改善高糖誘導的MAECs功能障礙
　　1)MAECs的鑒定：用免疫熒光方法鑒定MAECs，血管性血友病因子(vWF)/Hoechst33258雙染

7、陽性的細胞占細胞總數(shù)的82％。
　　2)非諾貝特減輕高糖誘導的MAECs粘附功能損傷：與對照組相比，高糖處理組的MAECs粘附能力明顯降低;非諾貝特處理后MAECs粘附能力顯著提高。
　　3)非諾貝特改善高糖誘導的MAECs小管形成功能障礙：與對照組相比，高糖處理組的MAECs小管形成能力明顯降低;非諾貝特處理后MAECs小管形成能力顯著提高。
　　4)非諾貝特阻止高糖誘導的MAECs內NO表達下降：與對照組相比，高糖

8、處理組的MAECs內NO水平明顯降低;非諾貝特處理后細胞內NO水平顯著提高。
　　5)非諾貝特抑制高糖誘導的MAECs內O2-表達：與對照組相比，高糖處理組的MAECs內O2-水平明顯上升;非諾貝特處理后細胞內O2-水平顯著降低。
　　6)非諾貝特促進高糖誘導的MAECs內eNOS和AMPK磷酸化激活：與對照組相比，高糖處理組的MAECs內p-eNOS和p-AMPK表達明顯降低;非諾貝特處理后細胞內p-eNOS和p-AMPK