海灘牽牛有效單體聯(lián)用效應(yīng)分析和抗炎機(jī)制研究.pdf

1、風(fēng)濕病(Rheumatism)是一組侵犯關(guān)節(jié)、骨骼、肌肉、血管及有關(guān)軟組織或結(jié)締組織為主的疾病，其中多數(shù)為自身免疫性疾病。潮汕地區(qū)中草藥海灘牽牛，俗稱白花馬鞍藤，拉丁名：Ipomoea stolonifera(Ipomoea imperati(Vahl))(IS)，人們用它祛濕通絡(luò)，治療風(fēng)濕病，特別是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，有著悠長(zhǎng)的歷史和顯著的療效，民間常用來(lái)治療炎癥相關(guān)疾病。因此，對(duì)IS有效部位各單體抗炎作用以及各單體聯(lián)用效應(yīng)和機(jī)制的分析，

2、為其臨床療效提供理論依據(jù)是十分有意義的。
　　本課題組前期研究，通過(guò)各種整體模型證明IS有效部位(EFIS)對(duì)急、慢性炎癥均有良好的抗炎作用；通過(guò)檢測(cè)巴豆油致小鼠耳腫脹部位MPO的活性，細(xì)胞因子IL-6、TNF-α、炎癥介質(zhì)NO、PGE2、LTB4的產(chǎn)生和釋放，進(jìn)一步揭示了EFIS的抗炎機(jī)制。有效部位經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的分離鑒定，得到5種單體成分，分別為橙皮素(Hesperetin，H)，秦皮乙素（Esculetin， E），傘形香豆素（

3、Umbelliferone，U），姜黃素（Curcumin，C）以及東莨菪亭（Scopoletin， S）。前期研究發(fā)現(xiàn)， EFIS單體東莨菪亭和橙皮素合用后，小劑量情況下呈協(xié)同作用，大劑量則為拮抗作用。在此基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)研究5個(gè)單體成分的抗炎活性，聯(lián)用后的配比劑量及其作用機(jī)制。選取巴豆油致小鼠耳腫脹和角叉菜膠致大鼠足腫脹兩個(gè)急性炎癥模型為指標(biāo)，研究5個(gè)單體成分的抗炎作用和研究5個(gè)單體聯(lián)用后的主要作用成分、最佳配比劑量；在細(xì)胞模型上檢測(cè)

4、各個(gè)單體對(duì)于炎性蛋白COX-2、5-LOX的蛋白表達(dá)水平影響和對(duì)MAPK通路的作用，探討IS的抗炎機(jī)制。
　　方法：
　　1.觀察5個(gè)單體對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹和角叉菜膠致大鼠足腫脹模型的抗炎活性；
　　2.利用均勻設(shè)計(jì)法研究5個(gè)單體聯(lián)用對(duì)兩個(gè)急性炎癥模型的影響，得到主要作用成分和最佳配比劑量；
　　3.在脂多糖(LPS)刺激的RAW264.7巨噬細(xì)胞模型中，用蛋白免疫印跡法(Western Blot)檢測(cè)EFIS

5、單體對(duì)COX-2、5-LOX、MAPKs家族成員ERK1/2和P38蛋白表達(dá)水平及ERK1/2和P38活性的影響。
　　結(jié)果：
　　1. EFIS中單體對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足腫脹都有顯著的抑制作用，以東莨菪亭和姜黃素的作用最強(qiáng)；
　　2.5個(gè)單體聯(lián)用在巴豆油致小鼠耳腫脹模型中，起主要作用的單體為東莨菪亭，姜黃素和傘形香豆素，最佳劑量配比為：H=600 mg/kg，E=500 mg/kg，U=1000 m

6、g/kg， C=200 mg/kg，S=80 mg/kg；在角叉菜膠致大鼠足腫脹模型中，起主要作用的單體為東莨菪亭，姜黃素和傘形香豆素，最佳劑量配比為：H=355 mg/kg，E=440 mg/kg， U=700 mg/kg，C=265 mg/kg，S=40 mg/kg。
　　3. EFIS中各單體均能抑制LPS誘導(dǎo)的COX-2和5-LOX蛋白表達(dá)，以姜黃素和東莨菪亭作用最為顯著；各單體均對(duì)LPS誘導(dǎo)的ERK1/2活性增加有抑制作

7、用，對(duì)總ERK蛋白表達(dá)無(wú)作用；對(duì)p-P38蛋白表達(dá)有抑制作用。
　　結(jié)論：
　　1. EFIS5個(gè)有效單體橙皮素、秦皮乙素、傘形香豆素、姜黃素和東莨菪亭對(duì)巴豆油致小鼠耳腫脹及角叉菜膠致大鼠足腫脹兩個(gè)急性炎癥模型有不同程度的抑制作用，提示各單體均為有效成分，具有抗炎活性。
　　2. EFIS5個(gè)單體聯(lián)用后在兩個(gè)急性炎癥模型中起主要作用的均為傘形香豆素、姜黃素和東莨菪亭；兩個(gè)急性炎癥模型中各單體的最佳配比劑量接近。即得到了