TRPM7通道在出生后小鼠耳蝸發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)、定位和功能研究.pdf

1、TRPM7(transient receptor potential melastatin7)是一種對(duì)于Mg2+和Ca2+都具有高通透性的非選擇性陽(yáng)離子通道。曾有報(bào)道TRPM7在發(fā)育的耳蝸中有表達(dá)。本文旨在研究①TRPM7在出生后小鼠耳蝸發(fā)育不同時(shí)期的細(xì)胞定位；②環(huán)境中的Mg2+對(duì)trpm7在耳蝸Corti器中表達(dá)水平的影響；③TRPM7在耳蝸毛細(xì)胞中的鎂離子轉(zhuǎn)運(yùn)功能。
　　我們的初步研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)RT-PCR檢測(cè)出生后不同發(fā)育時(shí)

2、期(P0、P7、P15、P21)的小鼠耳蝸中trpm7的表達(dá)情況，觀察到trpm7表達(dá)在P0時(shí)最高(P<0.05)，在隨后的發(fā)育過(guò)程中trpm7表達(dá)水平相對(duì)穩(wěn)定，Real-time PCR檢驗(yàn)不同發(fā)育時(shí)期Corti器的結(jié)果與上述一致。我們通過(guò)免疫熒光觀察了不同發(fā)育時(shí)期小鼠耳蝸TRPM7蛋白的細(xì)胞定位，首次觀察到TRPM7在毛細(xì)胞(CHCs)、血管紋(SVs)和螺旋神經(jīng)節(jié)(SGCs)三個(gè)部位隨著發(fā)育的表達(dá)水平的改變，提示TRPM7可能在耳

3、蝸發(fā)育過(guò)程中起著重要的作用。
　　我們還發(fā)現(xiàn)改變培養(yǎng)環(huán)境中Mg2+濃度能夠影響trpm7在體外培養(yǎng)的Corti器中的表達(dá)水平。Real-time PCR的結(jié)果顯示，分別用含10mM和30mM Mg2+的培養(yǎng)基培養(yǎng)P0小鼠的耳蝸Corti器，trpm7的表達(dá)與對(duì)照組(1.2 mM)相比分別減少70.3％(n=4，P<0.01)和43.5％(n=4，P<0.01)。這提示，耳蝸Corti器的中trpm7的表達(dá)受環(huán)境中鎂離子濃度的調(diào)節(jié)。

4、
　　我們應(yīng)用鎂離子熒光探針Mag-indo-1來(lái)檢測(cè)急性分離P7小鼠耳蝸外毛細(xì)胞(COHCs)游離鎂。我們發(fā)現(xiàn)，胞外鎂離子濃度的改變會(huì)影響COHCs胞內(nèi)的游離Mg2+的變化。用0.2μM Mg2+孵育能夠使COHCs胞內(nèi)Mg2+相對(duì)熒光強(qiáng)度與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，30 mM Mg2+孵育能夠使COHCs胞內(nèi)Mg2+相對(duì)熒光強(qiáng)度增至對(duì)照組的363.6％(n=6，P<0.01)。當(dāng)胞外Mg2+從0.2μM上升至30 mM時(shí)，對(duì)照組M

5、g2+相對(duì)熒光強(qiáng)度能夠增加至384.2％(n=19，P<0.01)。在上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加入500μM2-APB(TRPM7阻斷劑)后，胞內(nèi)Mg2+相對(duì)熒光強(qiáng)度增加至247.1％，與對(duì)照組相比有顯著減少(n=19，P<0.01)。結(jié)果提示TRPM7參與了COHCs中Mg2+的內(nèi)流。
　　綜上所述，①TRPM7在不同發(fā)育時(shí)期的小鼠耳蝸中有廣泛的表達(dá)和特異的細(xì)胞定位。②TRPM7在耳蝸Corti器的表達(dá)受環(huán)境中鎂離子濃度的調(diào)節(jié)。③COHC