人類β1，3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶7對HL-60細(xì)胞增殖與侵襲特性的影響.pdf

1、目的：β 1，3半乳糖基轉(zhuǎn)移酶7(β3GalT7)是β3糖基轉(zhuǎn)移酶大家族的一個新成員。蛋白質(zhì)O-糖基化的改變與細(xì)胞黏附和腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有研究提示該酶可能與腫瘤的生物學(xué)行為有關(guān)。本文通過上調(diào)及抑制β3GalT7基因在HL60細(xì)胞中的表達(dá)，來探討β3GalT7基因?qū)L60細(xì)胞的生長、增殖、侵襲能力等方面的影響。 方法：通過脂質(zhì)體介導(dǎo)將重組載體pEGFP-C1，pEGFP-C1-T7-Sense，pEGFP-C1-T7-Anti

2、sense)轉(zhuǎn)染入HL60細(xì)胞；利用MTT法檢測細(xì)胞增殖情況的變化，并用流式細(xì)胞儀分析各細(xì)胞株的細(xì)胞周期的改變以及Transwell侵襲實驗檢測其對HL60細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響；運用RT-PCR和Western blot檢測浸潤轉(zhuǎn)移相關(guān)功能基因TGFβ1、MMP2、。MMP14在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)變化。將隨機分成HL60組、HL60-0組、HL60-S組和HL60-AS組的裸鼠(BAm/c)分別給予各亞細(xì)胞株皮下接種以構(gòu)建

3、人粒細(xì)胞白血病HL60細(xì)胞異種移植瘤，并觀察致瘤時間和瘤的大小，組間對照進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析；對瘤組織進(jìn)行病理形態(tài)學(xué)觀察，并通過半定量RT-PCR檢測瘤組織中β3GalT7的表達(dá)。 結(jié)果：隨著β3GalT7基因表達(dá)的增高，細(xì)胞生長增殖加快，反之亦然。體外穿膜實驗結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染正義組細(xì)胞侵襲能力高于對照組(P

4、，MMP2、MMP14在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)下調(diào)。而β3GalT7和TGFβ1的表達(dá)則呈負(fù)相關(guān)。接種HL60-S細(xì)胞的裸鼠成瘤時間明顯縮短，成瘤率為100％，腫瘤終體積和重量均明顯大于接種HL60細(xì)胞組的裸鼠(P<0.01)；接種HL60-AS細(xì)胞裸鼠成瘤時間明顯延長，成瘤率為80％，腫瘤終體積和重量均明顯小于接種HL60細(xì)胞組裸鼠(PO．05)