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文檔簡介
1、水稻是最重要的糧食作物之一,全世界一半以上的人口以之為主食。氮在水稻生長發(fā)育過程中起著重要作用。然而,水稻的氮素吸收率較低。為了提高水稻產(chǎn)量,人們往往過量施用氮肥,這樣不僅增加了農(nóng)業(yè)成本,而且破壞了生態(tài)環(huán)境。轉(zhuǎn)基因技術為提高水稻氮肥吸收效率,減少氮肥施用量提供了一條有效途徑。 本研究是通過對具有耐低氮功能的玉米Dof1進行同源分析,分別在水稻和擬南芥Dof家族中找到高度同源的基因;通過Northern檢測水稻Dof家族在粳稻合江
2、19低氮脅迫材料中的表達譜,篩選水稻Dof家族中對低氮有應答的基因;分別構(gòu)建超表達載體,采用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化水稻,對獲得的轉(zhuǎn)基因植株進行分子檢測和功能研究。主要結(jié)果如下: 1、通過生物信息學Blast分析,選擇與玉米Dof1同源性較高的擬南芥Dof轉(zhuǎn)錄因子At2g37590(gi:145360721)為目標基因,構(gòu)建hpt和bar兩種不同選擇標記基因的超表達載體,分別命名為p13at和p33at;采用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化水稻恢復系明
3、恢86,分別得到19株和2株陽性植株。 2、通過生物信息學Blast分析得到與玉米Dof1同源性較高的水稻Dof轉(zhuǎn)錄因子OsDof-6(gi:19925962);通過Northern檢測水稻Dof家族在粳稻合江19低氮脅迫材料中的表達譜,篩選到對低氮脅迫有應答的水稻Dof轉(zhuǎn)錄因子OsDof-13(gi:19924314);分別構(gòu)建超表達載體,采用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化粳稻合江19,分別得到46株和52株陽性植株。 3、亞細胞瞬
4、時表達定位分析結(jié)果顯示At2g37590、OsDof-6和OsDof-13乃均定位于細胞核。 4、酵母單雜交試驗結(jié)果表明:At2g37590與PEPC、IDH啟動子區(qū)域有相互作用,但是OsDof-6和OsDof-13與PEPC、IDH啟動子區(qū)域沒有相互作用。 5、通過Southern雜交對OsDof-13 T<,0>代轉(zhuǎn)基因植株進行了拷貝數(shù)的檢測,外源片段以1-4個不等的拷貝數(shù)插入水稻基因組。 6、通過North
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