硒—甲基硒代半胱氨酸誘導乳腺癌MDA-MB-231細胞凋亡機制的研究.pdf

1、目的：本研究旨在從細胞水平研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-Methylselenoey-stein, MSC)對人乳腺癌MDA-MB-231細胞凋亡、氧化應激、端粒酶活性和凋亡分子caspase的影響，探討其誘導細胞凋亡的作用機理，為硒-甲基硒代半胱氨酸作為營養(yǎng)強化劑應用于乳腺癌的輔助化療，以及乳腺癌高危人群的營養(yǎng)預防提供理論和實驗基礎。
　　方法：1.不同濃度的MSC(12.5μM、25μM、50μM、100μM、200μM)R

2、PMI-1640培養(yǎng)液作用于人乳腺癌MDA-MB-231細胞24h、48、72h，MTT法檢測MSC對細胞增殖的抑制作用;Hoechst染色法觀察細胞凋亡形態(tài)。2.NBT法檢測MSC對細胞超氧化歧化酶(SOD)活性的影響;TBA法檢測MSC對細胞內丙二醛(MDA)水平的影響;比色法檢測MSC對細胞內總谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)水平的影響。3.ELISA法檢測端粒酶活性;RT-PCR法檢測細胞hTERT mRNA基因的表達。4.W

3、estern blot法檢測caspase3，8，9蛋白的表達。5.SPSS16.0進行數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計學分析。
　　結果：1.MTT法結果顯示MSC對MDA-MB-231細胞的增殖具有抑制作用，同一時間細胞存活率隨著MSC濃度的增加而逐漸降低，同一濃度細胞存活率隨著時間的增加而逐漸降低，各濃度組差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，其中200μM濃度抑制作用最明顯。Hoechst染色結果顯示MSC干預組細胞形態(tài)與對照組相比有差異高濃

4、度干預組細胞變圓、胞核皺縮、染色質濃縮，與對照組差異明顯，變化呈時間-濃度依賴性。2.除12.5μM濃度組(P＞0.05)，其余各濃度處理細胞后，各處理組細胞SOD、GSH-Px活力活力弱于對照組，MDA水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。隨著處理組MSC濃度的增加，作用時間的增加，變化逐漸增強。3.各MSC濃度處理組呈時間-濃度依賴性明顯抑制端粒酶活性和hTERTmRNA的表達(P＜0.01)。4.24h及48h后，凋