湖羊BMP7啟動子區(qū)轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩56頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、前期在湖羊羔皮毛囊中利用基因芯片技術(shù)篩選出不同花紋間差異表達基因BMP7,結(jié)合湖羊羔皮毛囊組織學(xué)特性關(guān)聯(lián)分析,確定BMP7作為候選基因,BMP7蛋白是TGF-β超家族中最大的分泌型信號傳導(dǎo)分子之一,BMP7除了與骨形成發(fā)生有關(guān),還被發(fā)現(xiàn)與羽毛胚芽的大小和空間分布有關(guān),在毛囊的發(fā)育與毛發(fā)生的生長中起著重要作用,但本身的調(diào)控機制并不清楚。為此,本研究對BMP7的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制進行初步研究,首先對湖羊不同組織進行BMP7表達水平分析,其次克隆B

2、MP7近端啟動子進行生物信息學(xué)分析,接著根據(jù)生物信息學(xué)分析結(jié)果與近端啟動子序列構(gòu)建系列缺失載體雙熒光素活性檢測,最后對轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點定點突變和轉(zhuǎn)錄因子過表達驗證,從而揭開BMP7啟動子區(qū)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制,為后續(xù)的研究提供依據(jù)。本研究主要通過以下幾個方面研究BMP7的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制:
  (1)利用RT-qPCR對BMP7在湖羊的各個組織表達情況進行分析,發(fā)現(xiàn)在羔皮毛囊組織中高表達。
  (2)通過NCBI數(shù)據(jù)庫得到BMP7轉(zhuǎn)錄

3、起始點上游大約2000bp下游500bp的調(diào)控序列,以2500bp的序列為基礎(chǔ)進行近端啟動子克隆,獲得了1757bp的序列。對BMP7近端啟動子上游轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域進行了生物信息學(xué)預(yù)測分析,發(fā)現(xiàn)在BMP7近端啟動子上游調(diào)控區(qū)存在-1216bp—-1166bp與-632bp—-582bp兩個轉(zhuǎn)錄起始位點;對CpG島分布情況分析,發(fā)現(xiàn)-549bp—+295bp處富含CpG島,進行轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點預(yù)測,發(fā)現(xiàn)有SP1、EGR1、NRF1、TFAP2

4、B等轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點。
  (3)根據(jù)BMP7近端啟動子序列設(shè)計啟動子系列缺失片段,將各個缺失片段構(gòu)建到雙熒光素酶報告基因載體上,轉(zhuǎn)染293T細胞進行雙熒光酶檢測不同缺失片段活性并進行顯著性比較,尋找雙熒光素酶活性最高的序列片段,發(fā)現(xiàn)核心區(qū)域-758bp—-545bp之間活性較高,對其進行生物信息學(xué)預(yù)測,發(fā)現(xiàn)存在轉(zhuǎn)錄因子SP1、EGR1可能結(jié)合位點,對BMP7啟動子轉(zhuǎn)錄調(diào)控起著一定作用。
  (4)為了進一步鑒定BMP7近端

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論