靈芝子實(shí)體多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)解析及免疫活性研究.pdf

1、靈芝（Ganoderma lucidum）為多孔菌科的擔(dān)子菌，在中國已有2000多年的民間藥用史，主要用于治療肝炎、慢性氣管炎、哮喘、心絞痛、高血壓、神經(jīng)衰弱和腫瘤等疾病。近年來，關(guān)于靈芝提取物的研究已在全世界范圍展開，多糖作為靈芝中主要的有效成分之一，受到了越來越多的關(guān)注。研究證明，靈芝多糖具有增強(qiáng)免疫功能、抑制腫瘤、降血糖、延緩衰老等作用。由于目前對靈芝均一多糖組分的詳細(xì)化學(xué)結(jié)構(gòu)報(bào)道較少，為系統(tǒng)地研究靈芝多糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性，本

2、文對靈芝子實(shí)體多糖組分進(jìn)行了分離純化、結(jié)構(gòu)解析及免疫活性研究。 本論文共有三個(gè)部分，分別從多糖的脫色工藝、分離純化和理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)分析和免疫活性等方面進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下： 1靈芝子實(shí)體多糖的分離純化及理化性質(zhì)研究119＃靈芝子實(shí)體經(jīng)醇脫脂，熱水浸提后超濾分級得到四個(gè)組分GLPA、GLPB、GLPC和GLPD。 通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，篩選出適宜GLPA脫色的工作條件為：AB-8樹脂、pn=4.0、T＝60

3、℃，在此條件下多糖脫色率可達(dá)87.38％，多糖保留率為89.24％，蛋白質(zhì)去除率為77.11％。 利用陰離子柱交換層析（DEAE-SepharoseFF）和凝膠柱層析（SephacrylS300）對GLPB進(jìn)行了分離純化，得到兩個(gè)均一多糖，用高效液相色譜法、苯酚-硫酸法和BCA法對其分子量、總糖含量和蛋白含量進(jìn)行鑒定，結(jié)果如下： GLPBW1-1和GLPBS1-1-a為白色絮狀樣品，且均易溶于水、二甲基亞砜，難溶于乙醇、

4、甲醇、丙酮等有機(jī)溶劑。 2靈芝子實(shí)體多糖結(jié)構(gòu)的初步研究通過紅外光譜分析、單糖組成分析、甲基化分析和核磁共振（一維：1HNMR譜、13CNMR譜；二維：1H-1HCOSY譜、TOCSY譜、NOESY譜、HMQC譜和HMBC譜）技術(shù)，研究了GLPBS1-1-a的化學(xué)結(jié)構(gòu)。 單糖組成分析結(jié)果表明GLPBS1-1-a含有巖藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖，以1：4.5：1.6：0.9組成。甲基化分析結(jié)果表明，巖藻糖以端基方式連接，半

5、乳糖主要以1，6-和1，2，6-兩種方式連接，還有一些其它的連接型式單糖殘基存在，三個(gè)主要?dú)埢哪柋燃s為1：4：1。由NMR進(jìn)一步分析結(jié)果表明GLPBS1-1-a存在以下結(jié)構(gòu)重復(fù)單元： 3靈芝子實(shí)體多糖的體外免疫活性研究GLPA及脫色后的GLPAT對小鼠脾淋巴細(xì)胞均無明顯刺激增殖作用；GLPB經(jīng)陰離子柱交換層析分離后，所得各組份GLPBW、GLPBS1和GLPBS2均有較高的刺激小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖作用，水相組分GLPBW增殖作