羅漢果皂苷V的體內(nèi)、體外代謝研究.pdf_第1頁(yè)
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1、目的:本實(shí)驗(yàn)以廣西特色植物羅漢果為研究對(duì)象,從羅漢果果實(shí)中分離得到足量的高純度羅漢果皂苷V單體。建立羅漢果皂苷Ⅴ(純度≥98%)動(dòng)物體內(nèi)、體外的代謝實(shí)驗(yàn)方法,研究其體內(nèi)外吸收與代謝成分,闡明體內(nèi)外代謝特點(diǎn)與規(guī)律,為羅漢果皂苷V開(kāi)發(fā)成功能食品和藥物提供科學(xué)依據(jù)。
  方法:甲醇浸提羅漢果果實(shí),提取物過(guò) D101大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行皂苷的富集。采用硅膠、HP-20ss、C18等分離材料,分離純化羅漢果皂苷V和其他幾個(gè)皂苷類成分,進(jìn)一步通過(guò)

2、制備液相制備得到大量純度達(dá)98%的羅漢果皂苷V單體。按50 mg/kg劑量將羅漢果皂苷V純品灌胃SD雄性大鼠,收集給藥后大鼠的尿液、糞便、血液和各臟器組織作為生物樣本。各生物樣品進(jìn)行純化后,采用HPLC-ESI-IT-TOF-MSn技術(shù)檢測(cè)其各代謝成分,利用島津液質(zhì)數(shù)據(jù)分析工作站對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析和推導(dǎo),鑒定結(jié)構(gòu),研究羅漢果皂苷 V的體內(nèi)吸收代謝特點(diǎn)和規(guī)律。此外,將純品羅漢果皂苷V臵于人工胃液中,37℃恒溫水浴下降解,考察羅漢果皂苷V在

3、0h、1h、2h、3h、4h這5個(gè)時(shí)間點(diǎn)的穩(wěn)定性,繼而了解羅漢果皂苷V口服后在胃液中的降解成分。羅漢果皂苷V在含有人的腸內(nèi)菌的培養(yǎng)基中,厭氧條件,37℃下培養(yǎng)48 h,水飽和的正丁醇對(duì)樣品進(jìn)行萃取,應(yīng)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)分析代謝成分。應(yīng)用大鼠肝S9體外孵化的方法模擬研究羅漢果皂苷V在肝臟中的代謝成分。
  結(jié)果:從羅漢果中分離并鑒定了4個(gè)化合物,分別鑒定為羅漢果皂苷ⅡE、Ⅲ、Ⅳ、V。通過(guò)制備液相,制備得到1.72 g羅漢果皂苷V純品

4、(純度≥98%)。通過(guò)羅漢果皂苷Ⅴ的體內(nèi)代謝實(shí)驗(yàn),從各生物樣品中發(fā)現(xiàn)了羅漢果苷V代謝產(chǎn)物36個(gè),其中尿液中5個(gè),糞便中21個(gè),血漿中1個(gè),組織中25個(gè)。代謝產(chǎn)物結(jié)構(gòu)都屬三萜及其苷類,為苷Ⅴ的次生皂苷或苷元的氧化產(chǎn)物。在部分生物樣品中仍可檢測(cè)到原形的存在,在血液中可以檢測(cè)到羅漢果皂苷ⅡE成分,推測(cè)其可能為吸收入血有效成分。羅漢果皂苷V在大鼠體內(nèi)主要發(fā)生的代謝反應(yīng)有脫糖基、異構(gòu)化、羥基化等。體外試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羅漢果皂苷V在人工胃液和人的腸道菌群培

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