應(yīng)用單克隆抗體評(píng)價(jià)捕食性天敵對(duì)麥長(zhǎng)管蚜的控制作用.pdf

1、采用目測(cè)法和網(wǎng)捕法對(duì)小麥整個(gè)生長(zhǎng)季節(jié)內(nèi)昆蟲(chóng)群落進(jìn)行了系統(tǒng)調(diào)查，共查得麥田昆蟲(chóng)10目、62科、113種，其中植食類8目、18科、51種，捕食類5目、11科、23種，寄生類2目、12科、24種，腐食和吸血類1目、12科、15種。采用最優(yōu)分割法分析了麥田昆蟲(chóng)群落的時(shí)間格局并提出了相應(yīng)的防治策略。從營(yíng)養(yǎng)層和功能團(tuán)角度對(duì)麥田結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)進(jìn)行了研究。 應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，在國(guó)內(nèi)外首次以捕食麥長(zhǎng)管蚜的多異瓢蟲(chóng)的消化道粗提物為免疫原，成功地制備出2株

2、高度特異性的麥長(zhǎng)管蚜單克隆抗體，分別命名為：EGA-4A9和EGA-2C4。應(yīng)用間接ELISA測(cè)定抗體效價(jià)的結(jié)果表明，2株單克隆抗體的效價(jià)非常高都達(dá)到4.09×10<'6>以上。這2株抗體都不與麥田中其它種類的昆蟲(chóng)及捕食者發(fā)生交叉反應(yīng)，而且也不與捕食其它蚜蟲(chóng)的多異瓢蟲(chóng)反應(yīng)，具有高度的特異性。利用鼠源單克隆抗體亞類鑒定試劑盒(ClonotypingTM System/HRP)以雙抗夾心ELISA方法進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明EGA-4A9和EGA

3、-2C4分泌的單克隆抗體均為IgG2a亞類。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western blot印跡分析表明，單克隆抗體EGA-4A9與取食麥長(zhǎng)管蚜后的多異瓢蟲(chóng)粗提物中21kDa和23kDa的多肽結(jié)合，單克隆抗體EGA-2C4與取食麥長(zhǎng)管蚜后的多異瓢蟲(chóng)粗提物中20kDa、22kDa和26kDa，的多肽結(jié)合。從結(jié)果可知，單克隆抗體的結(jié)合蛋白是麥長(zhǎng)管蚜在瓢蟲(chóng)消化道內(nèi)降解的中間產(chǎn)物。 對(duì)3種主要的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)的比較研

4、究表明，間接ELISA的靈敏度高于直接ELISA，分別為0.083μg/ml抗原蛋白和0.33μg/ml抗原蛋白，而雙抗夾心ELISA的靈敏度最差，根本無(wú)法使用。在不同的溫度和捕食量下，獵物在捕食者體內(nèi)成單峰型的降解曲線。溫度對(duì)獵物的可測(cè)定時(shí)間有顯著影響，隨著溫度上升獵物的可測(cè)定時(shí)間不斷縮短，特別是當(dāng)溫度達(dá)到30℃時(shí)，獵物的降解速率迅速上升，其可測(cè)定時(shí)間非常短，只有1.17天；而當(dāng)溫度在15℃～20℃之間時(shí)，獵物降解緩慢，可測(cè)定時(shí)間為3

5、.52和3.10天。捕食量對(duì)獵物的可測(cè)定時(shí)間也有顯著的影響，隨著取食量的增加，獵物的可測(cè)定時(shí)間也隨之延長(zhǎng)，在25℃時(shí)捕食量為1頭到3頭時(shí)，可測(cè)定時(shí)間從2.80天延長(zhǎng)到4.25天。 應(yīng)用麥長(zhǎng)管蚜單克隆抗體檢測(cè)了內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)場(chǎng)小麥田的捕食性天敵。結(jié)果表明，麥田的瓢蟲(chóng)種類較多，對(duì)麥長(zhǎng)管蚜有較好的控制作用。其中多異瓢蟲(chóng)和龜紋瓢蟲(chóng)的種群數(shù)量多，陽(yáng)性反應(yīng)率較高，控制作用最好。捕食性天敵總的陽(yáng)性反應(yīng)隨麥長(zhǎng)管蚜種群密度的增加而增加相關(guān)關(guān)系顯