應用單克隆抗體評價捕食性天敵對麥長管蚜的控制作用.pdf

1、采用目測法和網(wǎng)捕法對小麥整個生長季節(jié)內(nèi)昆蟲群落進行了系統(tǒng)調(diào)查，共查得麥田昆蟲10目、62科、113種，其中植食類8目、18科、51種，捕食類5目、11科、23種，寄生類2目、12科、24種，腐食和吸血類1目、12科、15種。采用最優(yōu)分割法分析了麥田昆蟲群落的時間格局并提出了相應的防治策略。從營養(yǎng)層和功能團角度對麥田結構和動態(tài)進行了研究。 應用雜交瘤技術，在國內(nèi)外首次以捕食麥長管蚜的多異瓢蟲的消化道粗提物為免疫原，成功地制備出2株

2、高度特異性的麥長管蚜單克隆抗體，分別命名為：EGA-4A9和EGA-2C4。應用間接ELISA測定抗體效價的結果表明，2株單克隆抗體的效價非常高都達到4.09×10<'6>以上。這2株抗體都不與麥田中其它種類的昆蟲及捕食者發(fā)生交叉反應，而且也不與捕食其它蚜蟲的多異瓢蟲反應，具有高度的特異性。利用鼠源單克隆抗體亞類鑒定試劑盒(ClonotypingTM System/HRP)以雙抗夾心ELISA方法進行檢測，結果表明EGA-4A9和EGA

3、-2C4分泌的單克隆抗體均為IgG2a亞類。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳和Western blot印跡分析表明，單克隆抗體EGA-4A9與取食麥長管蚜后的多異瓢蟲粗提物中21kDa和23kDa的多肽結合，單克隆抗體EGA-2C4與取食麥長管蚜后的多異瓢蟲粗提物中20kDa、22kDa和26kDa，的多肽結合。從結果可知，單克隆抗體的結合蛋白是麥長管蚜在瓢蟲消化道內(nèi)降解的中間產(chǎn)物。 對3種主要的酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)的比較研

4、究表明，間接ELISA的靈敏度高于直接ELISA，分別為0.083μg/ml抗原蛋白和0.33μg/ml抗原蛋白，而雙抗夾心ELISA的靈敏度最差，根本無法使用。在不同的溫度和捕食量下，獵物在捕食者體內(nèi)成單峰型的降解曲線。溫度對獵物的可測定時間有顯著影響，隨著溫度上升獵物的可測定時間不斷縮短，特別是當溫度達到30℃時，獵物的降解速率迅速上升，其可測定時間非常短，只有1.17天；而當溫度在15℃～20℃之間時，獵物降解緩慢，可測定時間為3

5、.52和3.10天。捕食量對獵物的可測定時間也有顯著的影響，隨著取食量的增加，獵物的可測定時間也隨之延長，在25℃時捕食量為1頭到3頭時，可測定時間從2.80天延長到4.25天。 應用麥長管蚜單克隆抗體檢測了內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學農(nóng)場小麥田的捕食性天敵。結果表明，麥田的瓢蟲種類較多，對麥長管蚜有較好的控制作用。其中多異瓢蟲和龜紋瓢蟲的種群數(shù)量多，陽性反應率較高，控制作用最好。捕食性天敵總的陽性反應隨麥長管蚜種群密度的增加而增加相關關系顯