miR-29a在膠質(zhì)瘤遷移、侵襲和增殖中的作用研究.pdf

1、第一部分miR-29a在膠質(zhì)瘤細胞和組織中的表達
　　目的：分別檢測 miR-29a基因在臨床膠質(zhì)瘤組織和實驗細胞株中的表達水平及其與不同級別膠質(zhì)瘤的關(guān)系。
　　方法：1.通過提取神經(jīng)小膠質(zhì)細胞株 N9和星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞株 U87的總microRNA,用熒光實時定量PCR的方法檢測miR-29a在這兩種細胞株中的表達量。2.通過收集近2年經(jīng)病理檢查確診的20例臨床膠質(zhì)瘤組織標(biāo)本以及10例患者正常腦組織標(biāo)本（含腦挫裂傷和癲

2、癇患者開顱手術(shù)治療者），均分別提取總 RNA；應(yīng)用熒光實時定量 PCR的方法檢測miR-29a在人腦膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中的表達情況。并進一步比較了miR-29a表達情況與不同級別膠質(zhì)瘤的相關(guān)性。
　　結(jié)果：1.以神經(jīng)小膠質(zhì)細胞N9作為對照，星形膠質(zhì)母細胞瘤細胞株U87中的miR-29的表達量要顯著高于對照組的含量(P<0.01）；2.以正常腦組織作為對照，臨床膠質(zhì)瘤腦組織標(biāo)本中的 miR-29的表達量也顯著高于對照組的含量(P

3、<0.01），且臨床分級越高，其表達水平越高。
　　結(jié)論： miR-29a在膠質(zhì)瘤細胞株U87和膠質(zhì)瘤組織中的表達水平顯著高于正常細胞和組織。而且miR-29a的表達水平與其臨床惡性分級密切相關(guān)，臨床分級越高，其表達水平越高。
　　第二部分miR-29a對U87細胞遷移、侵襲和增殖的影響
　　目的：觀察 miR-29a對膠質(zhì)瘤細胞株U87遷移、侵襲和增殖能力的影響，為進一步探索研究腦膠質(zhì)瘤細胞遷移、侵襲和增殖的機制以及

4、為膠質(zhì)瘤臨床診治提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：分別通過轉(zhuǎn)染 miR-29a模擬物提高 U87細胞內(nèi) miR-29a的表達水平，轉(zhuǎn)染miR-29a抑制劑下調(diào)U87細胞內(nèi)miR-29a的表達水平；觀察轉(zhuǎn)染了熒光素基團標(biāo)記的FAM-SiRNA在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)的綠色熒光判斷轉(zhuǎn)染效率；然后通過熒光實時定量PCR技術(shù)分別檢測兩組轉(zhuǎn)染后U87細胞中 miR-29a的表達水平；應(yīng)用細胞劃痕實驗、Transwell小室實驗和MTT實驗檢測miR-29

5、a對U87膠質(zhì)瘤細胞的遷移、侵襲以及增值能力的影響。
　　結(jié)果：1.熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)染了熒光素基團FAM-SiRNA的絕大多數(shù)細胞都呈現(xiàn)綠色熒光。同時應(yīng)用熒光實時定量PCR方法進一步確定轉(zhuǎn)染了miR-29a模擬物和抑制劑后U87細胞內(nèi)miR-29a的表達水平。2.轉(zhuǎn)染miR-29a模擬物的U87細胞在細胞劃痕實驗中的遷移能力增強，而轉(zhuǎn)染miR-29a抑制劑的U87細胞則遷移能力受到抑制。3.轉(zhuǎn)染miR-29a模擬物的 U8

6、7細胞在Transwell小室實驗即細胞侵襲實驗中遷移侵襲的細胞數(shù)目顯著上升，而轉(zhuǎn)染了miR-29a抑制劑的U87細胞則遷移侵襲的細胞數(shù)目顯著減少。4. MTT實驗結(jié)果表明轉(zhuǎn)染了miR-29a模擬物的U87細胞的增殖能力顯著增強，而轉(zhuǎn)染了miR-29a抑制劑的U87細胞的增殖能力則受到顯著的抑制。
　　結(jié)論：1. miR-29a模擬物和抑制劑的轉(zhuǎn)染效率很高，可以有效的上調(diào)或下調(diào)U87細胞內(nèi)miR-29a的表達量。2. miR-29