三種海水養(yǎng)殖魚類的主要細(xì)菌性疾病研究.pdf

1、牙鲆、大菱鲆及石鰈為我國北方工廠化養(yǎng)魚的主養(yǎng)魚類，但隨著工廠化養(yǎng)殖規(guī)模、養(yǎng)殖密度的不斷加大，以及缺乏規(guī)范的引種檢疫及在養(yǎng)殖過程中對疾病的有效控制，加之魚類所處的特定水生境更易于病原的播散等，使得某些病原細(xì)菌廣為擴(kuò)散，由某些病原細(xì)菌所引起的魚類感染，常表現(xiàn)出較大的流行面積、較高的發(fā)病率和死亡率，給相應(yīng)水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失。 2001～2004年間，對遼寧、河北及山東牙鲆、大菱鲆及石鰈養(yǎng)殖場所發(fā)生的疾病進(jìn)行了發(fā)病情況、發(fā)

2、病特點(diǎn)及病理變化等檢驗(yàn)、細(xì)菌分離與鑒定、血清型別檢定、病原學(xué)意義測定、藥物敏感性試驗(yàn)及防治技術(shù)等方面比較系統(tǒng)的檢驗(yàn)與研究。明確了相應(yīng)疾病的發(fā)病特征，系統(tǒng)了病原細(xì)菌的主要生物學(xué)性狀，明確了其種屬：闡明了病原細(xì)菌的致病作用，揭示了其感染特性；測定了病原細(xì)菌的血清型，并建立了在發(fā)病特點(diǎn)、病原分離與鑒定、免疫學(xué)檢驗(yàn)等方面的檢驗(yàn)技術(shù)，通過對所分離鑒定的病原細(xì)菌做藥物敏感性測定選擇出了可用于防治的敏感藥物，為對這些細(xì)菌性疾病及病原細(xì)菌的有效檢驗(yàn)與防

3、治、進(jìn)一步深入研究等提供了相應(yīng)的技術(shù)資料與方法。 本項(xiàng)研究先后對不同養(yǎng)殖場自然發(fā)病的11起牙鲆病例、4起大菱鲆病例及2起石鰈病例進(jìn)行了檢驗(yàn)，包括發(fā)病季節(jié)、易感魚齡、發(fā)病率及死亡率等方面的內(nèi)容，通過較詳細(xì)的調(diào)研與檢驗(yàn)，明確了相應(yīng)的發(fā)病情況與病理變化特征等。取所檢病魚病變組織進(jìn)行細(xì)菌檢驗(yàn)，結(jié)果從病變組織中均鏡檢到了大量細(xì)菌。 通過對細(xì)菌分離培養(yǎng)與純培養(yǎng)、形態(tài)與菌落特征、電鏡下的菌體形態(tài)、理化特性等表觀分類學(xué)指征鑒定及代表菌株

4、DNA中G+C mo1[％]的測定；同時擇代表菌株進(jìn)行了16SrRNA基因的分子鑒定，測定了16SrRNA基因序列、分析了相關(guān)細(xì)菌相應(yīng)序列的同源性、構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)生樹；以表型性狀鑒定結(jié)果，及細(xì)菌發(fā)育學(xué)分析的結(jié)果，進(jìn)行分離菌的種屬判定。結(jié)果表明所檢病魚分別為遲鈍愛德華氏菌、魚腸道弧菌、鰻利斯頓氏菌及兩種新病原弧菌一秦皇島弧菌和牙鲆弧菌(秦皇島弧菌根據(jù)細(xì)菌分離地命名，牙鲆弧菌根據(jù)分離的宿主魚命名)、嗜水氣單胞菌、格氏乳球菌、殺鮭氣單胞菌的一個

5、新亞種一殺鮭氣單胞菌殺鰈亞種(根據(jù)分離的宿主魚一石鰈命名)以及瓊氏不動桿菌，共9種細(xì)菌所引起的細(xì)菌性疾病。 取所分離鑒定的各種細(xì)菌的代表菌株，分別制備成福爾馬林滅活的全菌(OK)抗原及經(jīng)熱處理(121℃作用1h)的菌體(0)抗原，經(jīng)分別強(qiáng)化免疫接種家兔制備相應(yīng)抗血清，對相應(yīng)細(xì)菌做對應(yīng)及交叉凝集試驗(yàn)進(jìn)行了血清型檢定，明確了特異及交叉的抗原血清型別及血清同源性。為明確所分離鑒定的細(xì)菌的病原學(xué)意義，分別選取各種不同細(xì)菌的代表菌株進(jìn)行了

6、對健康牙鲆、大菱鲆及石鰈等的回歸感染試驗(yàn)，均能引起被感染魚的發(fā)病死亡且復(fù)制出了同自然病例樣的敗血癥病變等，并從人工感染病例中檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)及回收到了純一的原感染菌，明確了這些細(xì)菌的相應(yīng)病原學(xué)意義。 以相應(yīng)細(xì)菌抗血清進(jìn)行與待檢菌株的免疫血清學(xué)的玻片凝集反應(yīng)、免疫熒光抗體反應(yīng)等方面的檢驗(yàn)，結(jié)果在同種細(xì)菌間的熒光抗體檢驗(yàn)顯示了特異熒光反應(yīng)，玻片凝集反應(yīng)中也同樣是出現(xiàn)了特異凝集。初步表明了這些方法用于對被檢菌檢驗(yàn)的可行性。 經(jīng)對分離鑒