

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:促肝細胞生長素(PHGF)用于臨床治療肝衰竭(HF)已有多年,但PHGF對HF的作用機制尚未十分明確。既往研究表明PHGF對成人肝細胞(HH)的增殖具有一定的作用,本實驗擬通過復(fù)制HF細胞模型,研究PHGF對該模型的影響,并探討藥物作用的可能機制,為HF的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。 方法:本實驗采用肝衰竭患者血漿(LFP)添加到DMEM培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)HH細胞,復(fù)制體外HF細胞模型。實驗分為七組:胎牛血清(FBS)添加到
2、DMEM培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)HH細胞組(FBS組);正常人血漿(NHP)添加到DMEM培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)HH細胞組(NHP組);HF細胞模型PHGF未干預(yù)組(LFP組);HF細胞模型10μg/ml PHGF干預(yù)組、HF細胞模型20μg/ml PHGF干預(yù)組、HF細胞模型40μg/mlPHGF干預(yù)組、HF細胞模型80μg/ml PHGF干預(yù)組。采用倒置相差顯微鏡觀察FBS組、NHP組、LFP組細胞形態(tài),以及PHGF作用于HF模型后細胞形態(tài)的變化
3、。采用臺盼藍(trypanblue)染色、細胞增殖計數(shù)法(CCK-8)檢測不同實驗組、不同時間點(24h、48h、72h)細胞生長增殖情況;應(yīng)用流式細胞術(shù)(FCM)檢測HH細胞凋亡和DNA合成的變化;通過活性熒光定量檢測法檢測細胞色素P4503A4(CYP4503A4)酶活性;逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測CYP4503A4在mRNA水平表達量的改變。 結(jié)果:倒置顯微鏡下FBS組、NHP組中細胞形態(tài)正常;LFP組刪細
4、胞失去原有形態(tài);40μg/ml PHGF干預(yù)LFP組后細胞形態(tài)接近正常,且數(shù)目較未干預(yù)LFP組明顯增多。臺盼藍、CCK-8檢測結(jié)果顯示FBS組、NHP組中HH細胞生長良好,LFP組HH細胞呈抑制狀態(tài),PHGF體外干預(yù)后HH細胞的增生呈現(xiàn)時間和劑量依賴性。 FCM檢測細胞凋亡率結(jié)果顯示,F(xiàn)BS組為(1.87±0.18)%;NHP組為(2.68±0.39)%;LFP組為(30.13±3.95)%;40μg/mlPHGF組為(20.
5、14±2.88)%。與FBS組、NHP組相比,LFP組凋亡率增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與LFP組相比,40μg/ml PHGF組HH細胞的凋亡率降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與FBS、NHP組相比,LFP組G0/G1期增加,S期、G2/M期分布減少,差異有統(tǒng)計學(xué)意義;與LFP組相比,40μg/mlPHGF組G0/G1期相對減少,S期、G2/M期分布增加,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 活性熒光定量檢測酶活性結(jié)果顯示,F(xiàn)BS組為0.481±0.048
6、 nmol/(mg.min),NHP組為0.396±0.040 nmol/(mg.min),LFP組為0.196±0.020 nmol/(mg.min),40μg/mlPHGF組為0.264±0.025 nmol/(mg.min);與FBS組、NHP組相比,LFP組CYP4503A4酶活性降低;與LFP組相比,40μg/mlPHGF組CYP4503A4 mRNA酶活性上升,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。RT-PCR檢測mRNA灰度比值,F(xiàn)BS組為1
7、.001±0.072,NHP組為0.985±0.061,LFP組為0.503±0.038,40μg/mIPHGF組為0.726±0.048;與FBS組、NHP組相比,LFP組CYP4503A4 mRNA基因表達下降;與LFP組相比,40μg/mlPHGF組CYP4503A4 mRNA基因表達上調(diào),差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論:LFP體外培養(yǎng)HH細胞適合作HF的細胞模型;PHGF可能通過降低細胞凋亡,促進細胞增殖分裂,增強CYP450
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 粒細胞集落刺激因子聯(lián)合促肝細胞生長素對鼠肝損傷療效的觀察.pdf
- 促肝細胞生長素口服劑型的研究及評價.pdf
- 促肝細胞生長素對急性化學(xué)性肝損傷大鼠的保護作用研究.pdf
- 胸腺素β4對體外培養(yǎng)的正常人肝細胞增殖的影響及肝細胞癌患者血清胸腺素β4檢測.pdf
- 注射用促肝細胞生長素及其凍干工藝的研究.pdf
- 慢性重型肝炎病人血漿對培養(yǎng)的HepG2細胞及胎肝細胞、豬肝細胞體外影響初步觀察.pdf
- 促肝細胞生長素靶向脂質(zhì)體的制備及其抗肝纖維化作用的研究.pdf
- NGAL在單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎臟的表達及促肝細胞生長素對其影響.pdf
- 肝細胞生長因子對肝細胞癌侵襲和轉(zhuǎn)移的影響.pdf
- 體外肝細胞培養(yǎng)用于西藥肝毒性研究.pdf
- 肝切除患者血清對hiPSCs向肝細胞分化及肝細胞增殖影響的實驗研究.pdf
- 槲皮素對體外培養(yǎng)肝細胞膽固醇合成及外流的影響.pdf
- 肝祖細胞體外培養(yǎng)和向肝細胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf
- 肝動脈化療栓塞聯(lián)合動脈內(nèi)灌注促肝細胞生長素治療兔VX2肝癌的實驗研究.pdf
- 肝星狀細胞與肝細胞微載體共培養(yǎng)對肝細胞生物學(xué)特性影響的實驗研究.pdf
- 大黃、赤芍對肝衰竭大鼠肝細胞再生NO調(diào)控通路影響的研究.pdf
- 甲狀腺激素對急性肝衰竭大鼠肝細胞的保護作用.pdf
- 胸腺素β4促進肝前體細胞分化為肝細胞的體外研究.pdf
- Pleiotrophin對大鼠肝細胞生長及肝組織再生影響的研究.pdf
- 促肝細胞生長素對HSF、HSC-T6細胞增殖及α-,1-(Ⅰ)膠原基因啟動子活性影響的實驗研究.pdf
評論
0/150
提交評論