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文檔簡介
1、[目的]大量研究發(fā)現(xiàn)肥胖患者和2型糖尿病(T2DM)人群血漿中TNF-α水平明顯升高,因此肥胖和2型糖尿病被認為是一種慢性低度的炎癥狀態(tài)。過度表達的TNF-α在胰島素抵抗中被認為發(fā)揮了中心介質(zhì)的作用,但是其導(dǎo)致胰島素抵抗的分子機制目前尚不清楚。本研究利用高濃度腫瘤壞死因子(TNF-α)處理3T3-L1脂肪細胞系,模擬低度的炎癥狀態(tài)下的脂肪細胞,觀察成熟3T3-L1脂肪細胞的脂聯(lián)素(ADPN)mRNA、過氧化物酶體增殖體激活受體-γ(PP
2、AR-γ)mRNA、TNF-αmRNA、白細胞介素-6(IL-6)mRNA和白細胞介素-1β(IL-1β)mRNA表達的變化,探討TNF-α在炎癥-胰島素抵抗(IR)-2型糖尿病(T2DM)過程中的作用。
[方法](1)培養(yǎng)前脂肪細胞3T3-L1細胞,并觀察其誘導(dǎo)分化成熟過程中過氧化物酶體增殖活化受體-Y(PPAR-γ)mRNA、脂聯(lián)素(ADPN)mRNA的表達情況。(2)以高濃度(20μg/L)的TNF-α處理分化成熟的
3、脂肪細胞0.5、4、8、24h,提取總RNA,采用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測ADPNmRNA、PPAR-γmRNA、TNF-αmRNA、白細胞介素(IL)-6mRNA、IL-1βmRNA的表達情況。
[結(jié)果](1)3T3-L1細胞誘導(dǎo)分化過程中ADPNmRNA的表達呈逐漸上升趨勢,誘導(dǎo)后PPAR-γmRNA增加。(2)以高濃度TNF-α處理0.5h后PPAR-γmRNA表達水平并未出現(xiàn)明顯下降,4、8、24h時均低于對
4、照組(P<0.01),4h時降至最低。分化成熟的脂肪細胞中ADPNmRNA表達水平在TNF-α處理0.5、4、8h后隨著時間延長逐漸下降,8h時降至最低(P<0.01)。TNF-α處理0.5h后TNF-αmRNA表達水平明顯上升,并于4h時達峰值,各處理組均高于對照組(P<0.01);0.5h后IL-6mRNA表達水平明顯升高,各處理組均高于對照組(P<0.01)??瞻捉M、對照組和各TNF-α處理組IL-1βmRNA的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意
5、義(P>0.05)。
[結(jié)論]前脂肪細胞3T3-L1細胞系在誘導(dǎo)成熟過程中,PPAR-γmRNA和ADPNmRNA表達水平隨著誘導(dǎo)過程逐漸升高;TNF-α處理可以使成熟脂肪細胞炎癥因子TNF-αmRNA和IL-6mRNA表達水平升高;TNF-α處理可以使成熟脂肪細胞PPAR-γmRNA和ADPNmRNA表達水平下降,并呈時間依賴性。本實驗從分子生物學(xué)水平研究2型糖尿病的炎癥假說,TNF-α參與了炎癥-IR-T2DM的過程。
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