膿毒性休克早期液體復蘇的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 本課題通過建立并應用兔膿毒性休克模型，研究不同液體對兔膿毒性休克早期復蘇有創(chuàng)動脈血壓及組織灌注的影響；對血清組織因子、細胞間粘附分子-1、誘導型一氧化氮合成酶濃度的影響；對各臟器組織形態(tài)學及肺組織毛細血管內皮細胞核因子-κB表達的影響；觀察各復蘇液體對機體的副反應，為膿毒性休克早期復蘇液體的合理應用提供實驗依據(jù)。
　　 方法：
　　 1.成年健康雄性新西蘭大白兔20只，隨機平均分為假手術組及模型組，

2、采用兔改良盲腸結扎穿刺腹膜炎模型。比較肛溫、平均動脈壓、動脈血氣指標、動脈血乳酸值；行頸外靜脈血培養(yǎng)及腹水培養(yǎng)；計算成模時間；光鏡、透射電鏡下觀察膿毒性休克早期各臟器形態(tài)學改變；免疫組織化學法觀察兔肺組織毛細血管內皮細胞NF-κB表達并測量其灰度值；酶聯(lián)免疫吸附法測定并比較兩組兔血清TF、ICAM-1、iNOS濃度。
　　 2.成年健康雄性新西蘭大白兔40只，隨機平均分為生理鹽水復蘇組、4.2％高滲鹽復蘇組、7.5％高滲鹽復蘇組

3、、羥乙基淀粉復蘇組、羥乙基淀粉與高滲鹽1:1混合液復蘇組。根據(jù)初級復蘇方案及補充復蘇方案分別對成模動物用不同液體進行復蘇。記錄各復蘇組復蘇0小時、2小時、4小時收縮壓、舒張壓、平均動脈壓、血氣、動脈血乳酸值、血清鈉離子濃度。比較上述指標在不同復蘇方法不同復蘇時相變化的趨勢；比較不同復蘇方法間的差異；分別比較各組各時相上述指標與基線水平的差異；分別比較同一時相各組上述指標的差異。計算維持6小時復蘇所需復蘇液體量。觀察復蘇過程各組動物耐受性

4、。復蘇6小時處死動物，稱取右肺中葉3g肺組織計算并比較各組肺組織含水量。
　　 3.成年健康雄性新西蘭大白兔40只，隨機分組、模型制作及復蘇方案同上。復蘇第6小時處死動物，處死前取頸外靜脈血5ml，3500轉/分，離心3分鐘后取血清，ELISA法測定并比較各組血清TF、ICAM-1、iNOS濃度。動物處死后取心臟、肺組織、肝臟、脾臟、腸道、腎臟做HE染色，光鏡下觀察并比較各組器官病理形態(tài)學變化，IHC法觀察并比較肺組織毛細血管內

5、皮細胞NF-κB表達，灰度法測定并比較各組灰度值。
　　 結果：
　　 1.⑴制模成功時間為：18.91±1.38小時；⑵模型平均動脈壓MAP；⑶血氣：PH，PCO2，BE，HCO3－；⑷血乳酸；⑸血培養(yǎng)陽性：大腸埃希菌；腹水培養(yǎng)陽性：大腸埃希菌及陰溝腸桿菌；⑹肛溫于術后呈先上升后下降，假手術組肛溫較模型組差異有顯著性（39.63±0.50 vs.36.82±1.00，P＜0.01）；⑺成模后肛溫與MAP呈正相關關系，r

6、=0.748，P=0.013，方程：y（MAP）=34.46x+0.45；⑻肺干濕比及肺含水量無明顯差異 [（0.22±0.01 vs.0.19±0.29，P＞0.05），（78.17±1.38 vs.80.58±2.88，P＞0.05）]；⑼模型組肺組織大體標本可見點灶狀或大片狀出血，常規(guī)HE染色可見多臟器明顯病理學改變，模型組肺組織毛細血管內皮細胞NF-κB表達強陽性，灰度值較假手術組明顯降低（76.28±12.35vs.156.6

7、4±26.62，p＜0.01）；⑽血清TF、iNOS、ICAM-1較假手術組明顯升高（104.59±10.86 vs.73.77±9.48，4.71±0.56 vs.1.55±0.49，23.59±4.47 vs.12.78±2.46，p＜0.01）。
　　 2.⑴實驗動物的SBP、DBP、MAP、PH值、BE值、LA在不同復蘇液體不同復蘇時相變化的趨勢無差異（p=0.094，p=0.073，p=0.054，p=0.082，p=

8、0.278，p=0.954）；不同復蘇液體組間無差異（p=0.378，p=0.836，p=0.536，p=0.218，p=0.195，p=0.869）。除7.5％HS外，其余各組復蘇2小時SBP均較各復蘇組基線（復蘇0小時）升高（p＜0.01）；復蘇2小時未見各組DBP、MAP、PH值、BE值、LA較各自基線水平出現(xiàn)明顯差異；復蘇4小時HES組、HHS組MAP較7.5％HS組高（p＜0.05）。復蘇4小時NS組及7.5％HS組PH值較各

9、自基線水平降低（p＜0.05，p＜0.01）。復蘇4小時4.2％HS組、7.5％HS組BE值較NS組減少（p＜0.05，p＜0.01）。⑵動物血清[Na＋]在不同復蘇液體不同復蘇時相變化的趨勢有差異（p＜0.01），不同復蘇液體組間存在差異（p＜0.01），即：7.5％HS組及4.2％HS組血清[Na＋]呈升高趨勢，HHS組、HES組血清[Na＋]相對平穩(wěn)，NS組血清[Na＋]呈下降趨勢。復蘇2小時7.5％HS組血清[Na＋]明顯高于同

10、時間點NS組（p＜0.01）；復蘇4小時4.2％HS組、7.5％HS組血清[Na＋] 明顯高于同時點NS組（p＜0.05，p＜0.01）。⑶ 4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組液體使用量較NS組明顯減少（p＜0.01）；4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組液體使用量組間無差異（p＞0.05）。⑷與NS組相比，4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組肺組織含水量明顯減少（p＜0.01）；4.2％HS

11、組、HES組、HHS組、7.5％HS組肺組織含水量組間無差異（p＞0.05）。⑸ 7.5％HS組動物在復蘇過程中，尤其在復蘇2小時后，均有抽搐、口唇紫紺、躁動、血壓逐漸下降表現(xiàn)，按照補充復蘇方案復蘇血壓不升反降。其余各組動物復蘇全過程中未見與7.5％HS復蘇組動物相似表現(xiàn)。
　　 3.⑴各組病理學改變如下：①心：各復蘇組心臟病理學改變由輕到重順序為：7.5％HS組、HHS組、HES組、NS組、4.2％HS組。主要病理改變?yōu)樾募〖?/p>

12、胞水腫，炎性細胞浸潤。②肝：各復蘇組肝臟組織結構基本正常。③脾：各復蘇組脾臟病理學改變由輕到重順序為：7.5％HS組、HHS組、HES組、4.2％HS組、NS組。主要病理改變?yōu)槠⑴K脾竇擴張充血，白髓量和體積改變，中央動脈周圍的網(wǎng)狀細胞數(shù)量改變及吞噬現(xiàn)象。④肺：各復蘇組肺組織病理學改變由輕到重順序為：7.5％HS組、HHS組、HES組、4.2％HS組、NS組。主要病理改變?yōu)榉伍g質增厚，炎性細胞浸潤，部分肺泡不張等。⑤腎：各復蘇組腎臟病理學

13、改變由輕到重順序為：HHS組、HES組、4.2％HS組、NS組、7.5％HS組。主要病理改變?yōu)槟I小球球囊細胞數(shù)量的改變，球囊充血，腎小管水腫及顆粒樣變性。⑥腸：各復蘇組腸道組織病理學改變由輕到重順序為：7.5％HS組、HHS組、HES組、4.2％HS組、NS組。主要病理改變?yōu)槟c粘膜腺體水腫、崩解，腺體細胞間質炎性細胞浸潤，腺腔內淀粉樣物質沉積等。⑵模型組肺組織毛細血管內皮細胞NF-κB的免疫組織化學灰度值較假手術組明顯降低（p＜0.01

14、）；各復蘇組灰度值由小到大依次為NS組、HES組、4.2％HS組、HHS組7.5％HS組；4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組NF-κB免疫組織化學灰度值明顯高于NS組（p＜0.05，p＜0.05，p＜0.05，p＜0.01）；4.2％HS組，HES組，HHS組，7.5％HS組灰度值組間無差異。提示：灰度值越低，NF-κB表達越強。⑶①模型組較假手術組血清TF濃度明顯升高（p＜0.01）；NS組、4.2％HS組、HES組、

15、HHS組血清TF濃度明顯高于7.5％HS組（p＜0.05）；NS組、4.2％HS組、HES組、HHS組組間血清TF濃度無差異（p＞0.05）。②模型組血清iNOS濃度較假手術組顯著升高（p＜0.01）；不同復蘇組血清iNOS濃度值高低依次為：NS組、4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組；4.2％HS組、HES組、HHS組、7.5％HS組iNOS濃度較NS組iNOS濃度顯著降低（p＜0.01）；HHS組iNOS濃度較4.2％

16、HS組及HES組iNOS濃度低（p＜0.05）；4.2％HS組與HES組iNOS濃度無差異；7.5％HS組iNOS濃度顯著低于NS組、4.2％HS組、HES組、HHS組（p＜0.01，p＜0.01，p＜0.01，p＜0.01）。③模型組血清ICAM-1濃度顯著升高（p＜0.01）；不同復蘇組血清ICAM-1濃度值高低依次為：HES組、NS組、4.2％HS組、HHS組、7.5％HS組；NS組與4.2％HS組，NS組與HES組ICAM-1濃

17、度組間無差異（p＞0.05）；HES組ICAM-1濃度較4.2％HS組ICAM-1濃度高（p＜0.05）；HHS組與7.5％HS組ICAM-1濃度較NS組降低（p＜0.05，p＜0.01）；HHS組與7.5％HS組ICAM-1濃度較HES組低（p＜0.01）。
　　 結論：
　　 1.膿毒性休克早期進行液體復蘇可延緩兔膿毒性休克的血流動力學及組織器官灌注的惡化進程，并因此減輕臟器病理學損傷。
　　 2.HES在恢

18、復血流動力學改善組織灌注方面略優(yōu)于HHS，綜合炎癥調節(jié)方面僅次于HHS，膿毒性休克使用過程安全。
　　 3.HS較NS有較好的調節(jié)炎癥反應作用，濃度越高炎癥調節(jié)作用越強，但其副作用大，機體不易耐受，不適用于膿毒性休克早期復蘇。
　　 4.HHS可通過下調NF-κB活性降低血清ICAM-1、TF、iNOS水平，減輕炎癥反應對血管內皮的損傷，恢復血流動力學并改善組織低灌注，因此改善膿毒性休克引起的心、肝、脾、肺、腎、腸組織病